氟伐他汀对大鼠气道平滑肌增生的影响

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1、氟伐他汀对大鼠气道平滑肌增生的影响：李毅，戚好文，刘颖格，陈秉耀【关键词】氟伐他汀　　【Abstract】AIM：Tostudytheeffectsoffluvastatin,aneethylglutarylcoenzymeA(HMG-CoA)reductase,ontheproliferationofairoothmusclecell(ASMC)fromrats.METHODS：MTTandcellgroulatedbyfetalcalfserumorhistamine.TheinhibitoryrateoftheproliferationofASMC

2、ol・L-1or10-4mol・L-1andthereulatedbyfetalcalfserumorhistamine.　　【Keyuscle，smooth;hyperplasia;asthma　　【摘要】目的:观察氟伐他汀（Fluvastatin）对离体培养的大鼠气道平滑肌（AiroothMuscleCell,ASMC）增生的影响.方法:MTT法及细胞计数检测体外培养的ASMC的增生.结果:氟伐他汀对于由血清和组织胺刺激引起的ASMC增生均具有抑制作用(P<0.01)，1×105mol・L-1浓度的氟伐

3、他汀对ASMC的增生的抑制率达20%以上，而1×10-4mol・L-1浓度的氟伐他汀则可完全抑制ASMC的增生.结论:氟伐他汀可抑制ASMC的增生，且这种作用与其浓度呈一定相关性.　　【关键词】氟伐他汀;气道；肌，平滑;增生；哮喘　　0引言　　哮喘是一种慢性气道反应性炎症，其主要临床特征为气道高反应性和可逆性的气道阻塞.大量尸体解剖资料显示，哮喘患者气道内不仅有炎症存在，还有气道平滑肌细胞（AiroothMuscleCell,ASMC）的显著增生［1-4］.ASMC增生是产生气道重建（Airodeling）的重要原因，并与气道高反应性的发生

4、密切相关，气道重建已成为哮喘发病机制中具有特殊意义的因素，如何抑制哮喘患者气道重建是国内外医学界所广泛关注的课题［３，４］.国内外学者已采用多种方法对气道重建的发生机制及如何防治进行了广泛研究，并取得初步进展.近年来有研究发现氟伐他汀（Fluvastatin）不但有降低人体内胆固醇的作用，还发现它对多种细胞的增生具有抑制作用.本研究观察氟伐他汀对离体培养的大鼠ASMC增殖的影响，为氟伐他汀用于防治哮喘患者气道重建提供实验依据.　　1材料和方法　　11材料Ⅳ型胶原酶、兔抗鼠βactinmAb、组织胺、MTT：Sigma公司；DMEM：Gibco公司；胎牛血

5、清（FCS）：杭州四季青生物制品工程公司；氟伐他汀：瑞士诺华制药有限公司.　　12方法　　1.2.1大鼠ASMC分离与培养健康、雄性SD大鼠（第四军医大学实验动物中心提供）1只，体质量260g，脊椎脱臼法处死，无菌剥离气管，细心剥离气管内、外膜，剪碎剩余组织块，约1mm×1mm×1mm大小，2g・L-1Ⅳ型胶原酶37℃消化2次，每次30min，中间吹打组织块1次，用含100mL・L-1胎牛血清的DMEM冲洗，100目不锈钢网过滤，离心后制成细胞悬液，接种于培养瓶内.　　1.2.2大鼠ASMC纯化经原代培养后，细胞呈多克隆生长，

6、选择细胞形态呈梭形的克隆在倒置显微镜下机械分离.分离所得细胞继续培养一代，2.5g・L-1胰酶短暂消化，13传代，静置细胞30min，去除未贴壁细胞，利用平滑肌细胞容易贴壁的特性进一步纯化所得细胞.　　1.2.3大鼠ASMC鉴定ASMC离体培养时呈梭形，有较长的突起，细胞核位于细胞中央，排列成旋涡状、放射状或栅栏状是其生长特点.培养细胞经SABC免疫组织化学鉴定，98%细胞βactin阳性.4~12代于对数生长期的细胞用于实验.　　1.2.4对ASMC生长的影响以2×104个/孔将细胞接种于96孔培养板内，37℃下孵育36h使细胞贴壁，弃上

7、清液，无血清DMEM清洗2遍，进行以下试验①血清培养试验:每孔先加入100mL・L-1FCS约200μL，再加入氟伐他汀使其终浓度分别为1×10-5mol・L-1，1×10-4mol・L-1；②组织胺培养试验：每孔加入10mL・L-1FCS约200μL，然后加入组织胺使其终浓度为1×10-2mol・L-1，最后加入氟伐他汀，终浓度分别为1×10-5mol・L-1，1×10-4mol・L-1；③经上述处理后，置于37℃，50mL・L-1CO2条件

8、下分别培养1，2，3，4d后取出.每孔加MTT液（5g・L-1）2