氟伐他汀对高血压肾脏硬化大鼠肾脏细胞凋亡的影响

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1、氟伐他汀对高血压肾脏硬化大鼠肾脏细胞凋亡的影响【关键词】高血压肾脏硬化;氟伐他汀;细胞凋亡　　[Abstract]Objective:ToassesstheapoptosisoccurringinthekidneyofSDratsinducedbyLnitroargininemethylester(LNAME)overtimeandinvestigatetheeffectsoffluvastatintreatment.Methods：MaleSDratsinisteredbyLNAMEtoformhypertensivenep

2、hropathy，thentheratsinisteredbyfluvastatin，atlasttheratshadtheirkidneysremovedtomeasureproteinexpressionofFas，FasL，BaxandBcl2genesbyE，Sigma公司)，氯胺酮(江苏恒瑞医药有限公司)，氟伐他汀(北京诺华制药公司)，Fas、FasL、Bax和Bcl2抗体(南京凯基生物工程有限公司)。　　1.1.3实验仪器无创尾动脉血压分析系统(上海奥尔科特生物科技有限公司)，病理切片机(德国LeicaRM2135)，显微

3、照相及图像分析系统(德国LeicaQE50mg·kg-1·d-1灌胃给药，8周后造模成功的15只大鼠随机分为两组，一组为氟伐他汀组(8只)：给予5mg·kg-1.d-1氟伐他汀灌胃，共8周;另一组为高血压肾脏硬化组(7只)：予等量生理盐水灌胃，共8周，每周测量各组大鼠体质量，根据体质量调整药物剂量。　　1.2.2血压的测定第0，2，4，6，8，10，12，14，16周予尾动脉测血压，收缩压≥140mmHg定为高血压。　　1.2.3组织标本的采集给药结束后无痛处死大鼠，取出肾脏，并用冰生理盐水经肾动脉冲洗至发白，标本一部分用4%低聚甲醛固定

4、，石蜡包埋制备切片，行HE和Masson染色，由两位病理科医生进行肾小球硬化评分：观察5个视野20个肾小球，计算每个肾小球内细胞数，再取平均值，计算出单个肾小球内细胞数;根据每个肾小球变性坏死程度、单个肾小球内细胞数、系膜基质区大小、毛细血管狭窄或扩张程度及球囊粘连程度等，进行损伤性评分：没有损伤记为0分，轻度损伤记1分，中度损伤记2分，重度损伤记3分，几乎完全损伤记4分。肾小球损伤指数=(1×n1/20+2×n2/20+3×n3/20+4×n4/20)×100，其中n分别代表不同损伤程度的肾小球个数。　　1.2.4细胞凋亡的检测采用蛋白

5、质印迹方法测定Fas、FasL、Bax和Bcl2蛋白浓度。首先将肾皮质称重，加入裂解液以及蛋白酶抑制剂，制作匀浆，按比例配制分离胶和浓缩胶，加样后电泳，转膜，封闭抗体杂交，最后将PVDF膜放入BIORAD凝胶成像系统，用软件计算灰度值。　　1.2.5统计学分析所有资料采用SPSS11.5软件处理，计量资料以均数±标准差表示，多组间比较用单因素方差分析，两组比较用LSD法。2结果　　2.1各组大鼠收缩压的变化　　LNAME灌胃后，造模大鼠2周血压即升高，到第4周时形成稳定的高血压模型，4周时收缩压>140mmHg,均达到高血压诊断

6、标准。8周时正常对照组收缩压为(102.6±6.48)mmHg，高血压肾脏硬化组为(213.8±13.44)mmHg，氟伐他汀组为(216.6±11.44)mmHg，高血压肾脏硬化组和氟伐他汀组相比，血压的差异无统计学意义(P>0.05)。16周时正常对照组收缩压为(106.7±7.26)mmHg，高血压肾脏硬化组为(207.3±11.53)mmHg，氟伐他汀组为(199.3±11.61)mmHg,高血压肾脏硬化组和氟伐他汀组相比，血压的差异无统计学意义(P>0.05)，氟伐他汀对血压没有影响，见图1。　　2.3细胞凋亡的检测

7、结果　　高血压肾脏硬化组肾皮质的Bax、Fas和FasL蛋白表达水平显著高于正常对照组，Bcl2蛋白表达水平显著低于正常对照组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05);而氟伐他汀组Bax、Fas和FasL蛋白表达水平与高血压肾脏硬化组比较显著降低，Bcl2蛋白表达水平与高血压肾脏硬化组比较显著升高，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见图4、5和表2。表2各组大鼠Bax、Bcl2、Fas和FasL蛋白灰度值表达与正常对照组比较，a：P<0.05;与高血压肾脏硬化组比较，b：P<0.05　　3讨论　　细

8、胞凋亡和细胞增生共同调节肾脏各部分细胞总量的平衡，细胞凋亡可参与高血压肾脏硬化的发生,并在调节靶器官细胞数量方面发挥重要作用。高血压可能作为一种触发因素,激活凋亡基因表达,从而诱导或抑制细胞凋