氟伐他汀对大鼠气道平滑肌增生的影响论文

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1、氟伐他汀对大鼠气道平滑肌增生的影响论文李毅，戚好文，刘颖格，陈秉耀【关键词】氟伐他汀【Abstract】AIM：Tostudytheeffectsoffluvastatin,aneethylglutarylcoenzymeA(HMG-CoA)reductase,ontheproliferationofairoothmusclecell(ASMC)fromrats.METHODS：MTTandcellgroulatedbyfetalcalfserumorhistamine.Theinhibitoryrateofthepr

2、oliferationofASMColL-1or10-4molL-1andthereulatedbyfetalcalfserumorhistamine.【Keyuscle，smooth;hyperplasia;asthma【摘要】目的:观察氟伐他汀（Fluvastatin）对离体培养的大鼠气道平滑肌（AiroothMuscleCell,ASMC）增生的影响.方法:MTT法及细胞计数检测体外培养的ASMC的增生.结果:氟伐他汀对于由血清和组织胺刺激引起的ASMC增生均具有抑制作用(P0.01)，1×105molL-1浓度

3、的氟伐他汀对ASMC的增生的抑制率达20%以上，而1×10-4molL-1浓度的氟伐他汀则可完全抑制ASMC的增生.结论:氟伐他汀可抑制ASMC的增生，且这种作用与其浓度呈一定相关性.【关键词】氟伐他汀;气道；肌.freeloothMuscleCell,ASMC）的显著增生［1-4］.ASMC增生是产生气道重建（Airodeling）的重要原因，并与气道高反应性的发生密切相关，气道重建已成为哮喘发病机制中具有特殊意义的因素，如何抑制哮喘患者气道重建是国内外医学界所广泛关注的课题［３，４］.国内外学者已采用多种方法对气道

4、重建的发生机制及如何防治进行了广泛研究，并取得初步进展.近年来有研究发现氟伐他汀（Fluvastatin）不但有降低人体内胆固醇的作用，还发现它对多种细胞的增生具有抑制作用.本研究观察氟伐他汀对离体培养的大鼠ASMC增殖的影响，为氟伐他汀用于防治哮喘患者气道重建提供实验依据.1材料和方法11材料Ⅳ型胶原酶、兔抗鼠βactinmAb、组织胺、MTT：Sigma公司；DMEM：Gibco公司；胎牛血清（FCS）：杭州四季青生物制品工程公司；氟伐他汀：瑞士诺华制药有限公司.12方法1.2.1大鼠ASMC分离与培养健康、雄性S

5、D大鼠（第四军医大学实验动物中心提供）1只，体质量260g，脊椎脱臼法处死，无菌剥离气管，细心剥离气管内、外膜，剪碎剩余组织块，约1mm×1mm×1mm大小，2gL-1Ⅳ型胶原酶37℃消化2次，每次30min，中间吹打组织块1次，用含100mLL-1胎牛血清的DMEM冲洗，100目不锈钢网过滤，离心后制成细胞悬液，接种于培养瓶内.1.2.2大鼠ASMC纯化经原代培养后，细胞呈多克隆生长，选择细胞形态呈梭形的克隆在倒置显微镜下机械分离.分离所得细胞继续培养一代，2.5gL-1胰酶短暂消化，13传代，静置细胞30min，去

6、除未贴壁细胞，利用平滑肌细胞容易贴壁的特性进一步纯化所得细胞.1.2.3大鼠ASMC鉴定ASMC离体培养时呈梭形，有较长的突起，细胞核位于细胞中央，排列成旋涡状、放射状或栅栏状是其生长特点.培养细胞经SABC免疫组织化学鉴定，98%细胞βactin阳性.4~12代于对数生长期的细胞用于实验.1.2.4对ASMC生长的影响以2×104个/孔将细胞接种于96孔培养板内，37℃下孵育36h使细胞贴壁，弃上清液，无血清DMEM清洗2遍，进行以下试验①血清培养试验:每孔先加入100mLL-1FCS约200μL，再加入氟伐他汀使其

7、终浓度分别为1×10-5molL-1，1×10-4molL-1；②组织胺培养试验：每孔加入10mLL-1FCS约200μL，然后加入组织胺使其终浓度为1×10-2molL-1，最后加入氟伐他汀，终浓度分别为1×10-5molL-1，1×10-4molL-1；③经上述处理后，置于37℃，50mLL-1CO2条件下分别培养1，2，3，4d后取出.每孔加MTT液（5gL-1）20μL，再于37℃下孵育4~6h后中止培养，弃上清，每孔加DMSO150μL，振荡10min，使结晶物溶解，在酶联免疫检测仪测各孔A490nm值.1.

8、2.5细胞分裂指数的测定将平滑肌细胞以8×104个/瓶接种于置有小盖玻片的25mL培养瓶中，24h孵育贴壁后加入氟伐他汀，使其终浓度分别为1×10-5molL-1和1×10-4molL-1，于37℃，50mLL-1CO2条件下培养48h后将盖玻片取出，95gL-1乙醇固定30min，HE染色封片.选取密度适中的区域计数1000个细