没食子酸诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡机制的探讨.pdf

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1、中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2014May；30(5)：657～61·657·网络出版时间：2014—4一l814：13网络出版地ill：：http：／／www．cnki．net／kcms／doi／10．3969／j．issn．1001—1978．2014．05．015．html没食子酸诱导人肝癌细胞SMMC．7721凋亡机制的探讨李沐涵，王明艳，赵凤鸣，陈海彬，周红光，赵青春，李文婷，吴勉华(南京中医药大学第一临床医学院，江苏南京210023)doi：10．3969

2、／j．issn．1001—1978．2014．05．015肿瘤细胞凋亡的中药或提取物已成为当前研究肿瘤文献标志码：A文章编号：1001—1978(2014)05—0657—05治疗的热点之一。没食子酸(gallicacid，GA)是一中国图书分类号：R282．71；R329．24；R329．25；R735．702．2；种有机酸，化学名是3，4，5-三羟基苯甲酸，是山茱R916．4萸]、大黄]、桑螵蛸[4等多种天然中草药的主要摘要：目的探讨没食子酸(gallicacid，GA)抑制人肝癌细成分。实验研究表明，GA可

3、以抑制多种肿瘤细胞胞SMMC-7721增殖的作用，揭示其促凋亡的相关分子机制。增殖，对肿瘤细胞有促进凋亡的作用。本文研究方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721，MTI"法观察细胞GA体外对人肝癌细胞SMMC-7721增殖抑制活性、在GA作用24、48、72h后的增殖情况；用倒置显微镜观察细凋亡相关基因p53表达的影响，探讨其可能的作用胞形态学的变化；透视电镜观察细胞内部结构变化；AnnexinV．FITC／PI检测细胞凋亡；采用RT—PCR技术研究p53mRNA机制，为GA用于临床抗肿瘤治疗提供更多的实验的变化

4、；应用Westernblot法检测053蛋白水平的表达。探依据。讨GA对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导凋亡作用及机制。1材料与仪器结果剂量为6．25—50m0l·LGA作用SMMC-7721细1．1材料GA购自中国药品生物制品检定所(纯胞48h有明显的增殖抑制活性，引起核固缩、凝聚、碎裂，诱度>99％，批号：110831．201002)，用RPMI1640导细胞凋亡，并呈剂量依赖性；RT-PCR和Westernblot结果(26800-020，Gibco公司)配置成浓度为1mmol·显示，GA能升高p53mR

5、NA水平和053蛋白表达。结论L的母液储存液，0．22m过滤除菌，分装、避光保GA可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖，诱导凋亡，可能存于一20℃冰箱；Irr(M2108，Sigma)溶于PBS中，与其上调肿瘤相关抑癌基因p53有关。浓度为5g·L～，4~C避光保存于冰箱，1周弃用；小牛血清(20110809，杭州四季青公司)；胰蛋白酶、关键词：没食子酸；肝癌；SMMC-7721细胞；增殖；细胞凋亡；青、链霉素双抗液、DMSO、TRIzolReagent、RT—PCR抑癌基因p53；试剂盒均购自美国Sigma

6、公司；人肝癌细胞株SMMC-7721、AnnexinV—FITC／PI、Hoechst33258检原发性肝癌是世界上死亡率第三的恶性肿瘤，测试剂盒等，均购自于南京凯基生物公司；p53mR—由于我国大量乙型肝炎感染人群的存在，肝癌在我NA由上海生工合成，一抗p53(1：1000，CellSigna—国高发J。目前，肝癌治疗手段是以手术和化学治ling)。疗为主的综合治疗。这些疗法确切，效果明显，但受1．2仪器倒置显微镜和电镜购自日本Olympus确诊时间、肝功能、肿瘤数目和有无血管、淋巴结转公司；电泳仪、转膜仪、高

7、速冷冻离心机、酶标仪、移等因素的制约和影响，导致肝癌患者整体预后差，PCR仪、Westernblot曝光仪均购自于Bio—Rad公平均存活时间短。近年来，中药治疗肿瘤因其独特司；CO2培养箱(SANYOMCO175，日本三洋公司)；的优势越来越多地引起人们的重视，寻找能够诱导流式细胞仪(CLOUTEREPICS—XL，美国Beckman．收稿日期：2014一Ol一22，修回日期：2014—02—29coulter公司)；细胞超净工作台(JJT-900／1300，苏州基金项目：国家重点基础研究发展计划(973计划)

8、中医理论专项课净化公司)。题(No2006CB504807)；国家自然科学基金资助项目(N030973742，81273717，81102563)；教育部博导课题(No2方法20113237110001)2．1细胞培养人肝癌细胞株SMMC-7721体外接作者简介：李沐涵(1983一)，女，博士生，研究方向：中医内科学肿瘤种于RPMI1640完全培养液(内含有10％小牛血方