槲皮素对人肝癌SMMC-7721细胞生长抑制及诱导凋亡作用.pdf

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1、中国实验诊断学2015年1月第19卷第1期一17一文章编号：1007—4287(2015)01—0017—03槲皮素对人肝癌SMMC一7721细胞生长抑制及诱导凋亡作用史桂兰，黄琳，卿海燕，陈琦(解放军208医院肿瘤科，吉林长春130062)肝癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，多数肝SMMC-7721细胞的生长抑制作用，并计算IC。值。癌发现时已为晚期，进展快，预后差L1]，从天然植物1．4Giemsa染色观察细胞形态中寻找高效低毒的抗肝癌药物的一直是研究热预先放置无菌盖玻片的6孔板每孔接种5×点_2]。槲皮素(1，3，4，5，7-五羟

2、基黄酮，Quercetin)10个SMMC一7721细胞，培养过夜加入槲皮素，48是存在于多种植物的果实和花中的天然黄酮类物h后取出盖玻片，用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗两遍，质，槲皮素具有抗炎、抗过敏、抗氧化、抗病毒、调节4％对聚甲醛固定，按照说明书的方法染色，水洗，干免疫、降血脂、抗氧化，抗癌等多种生物学活性，研究燥，镜检。表明槲皮素体外可以抑制结肠癌、胃癌、卵巢癌、乳1．5AO染色检测细胞凋亡腺癌等多种肿瘤细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞凋收集槲皮素作用48h的SMMC一7721细胞，调亡[3_8]。本研究体外观察槲皮素对人肝癌SMMC

3、一整细胞浓度为1×10／ml，移液器吸取95l细胞悬7721细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用，为其进一步液于5m1离心管内，加入5tL1AO储存液混匀，AO应用于临床治疗肝癌提供理论依据。终浓度为0．1mg／ml，吸取1Ol细胞悬液滴于显微1料和方法载玻片上，盖玻片封片，避免封入气泡，荧光显微镜1．1细胞培养下观察细胞形态，摄片。人肝癌SMMC-7721细胞由吉林大学基础医学1．6AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞仪检测细胞院病理教研室馈赠，10胎牛血清(Fetalbovinese—凋亡rum，FBS)高糖DMEM培养基培养，添

4、加青霉素参照文献n方法，严格按照说明书操作，采用(100U／m1)和链霉素(100t~g／m1)，于37℃，5流式细胞仪测定槲皮素作用48h的SMMC一7721CO。培养箱中培养。细胞的凋亡率。1．2药品和试剂1．7统计学分析高糖DMEM培养基(美国Sigma公司)，胎牛实验数据以±S表示，SPSS13．0软件统计处血清(杭州四季清公司)，3-(4，5-二甲基噻唑一2)．2，理，P％0．05为差异有统计学意义。5．二苯基四氮唑溴盐(MTT，美国Sigma公司)，Gi—2结果emsa染色试剂盒购自北京鼎国生物技术公司，吖啶2．1槲皮素对

5、肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制橙(AO)染色试剂盒购自南京凯基生物公司，An—作用nexinV．FITC／PI细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯对照组SMMC一7721细胞生长活跃，SMMC一基生物公司。槲皮素购自美国Sigma公司，用前溶7721细胞在10，20，40，6O，80，100~mol／I懈皮素于二甲基亚砜(DMSO)配制成1mol／L溶液，加药作用24、48和72h后，生长均不同程度减慢，抑制前用含10DMSO的双蒸灭菌水配制成所需的实率逐渐升高，并呈明显的浓度和时间依赖性(表1)，验浓度。槲皮素作用SMMC-7721细

6、胞48h的IC。为48．81．3MTT法检测槲皮素对肝癌SMMC-7721细胞gmol／L。生长的影响2．2肝癌SMMC-7721细胞的形态改变96孑L板每孔接种SMMC一7721细胞1×10个，对照组细胞形态规则，大小较一致，贴壁生长；参考文献]MTT法测定100、8O、40、20、10、0槲皮素ICso组部分SMMC一7721细胞脱落悬浮于培／~mol／L槲皮素作用24、48和72h对人肝癌养液中，贴壁细胞密度低，形态不规则，收缩变圆。中国实验诊断学2015年1月第19卷第1期3讨论形态学观察结果一致，确证槲皮素对肝癌SMM-大量

7、研究表明，肿瘤的发生发展与细胞凋亡有7721细胞的增殖抑制作用是通过诱导其凋亡实现关Ll，目前临床应用的多种化疗药物主要是通过诱的。导其凋亡而发挥作用的，从天然植物中寻找高效低参考文献：毒的抗肿瘤药物是当前的研究热点之一。本研究首[1]ParkinDM，BrayF，FerlayJ，eta1．Globalcancerstatistics，2002口]．CACancerJClin，2005，55：74．先采用MTT法检测了槲皮素对肝癌SMMC一7721[2]Asia—‘PacificWorkingPartyonPreventionofHe

8、patocellularCar—-细胞的增殖抑制作用，结果发现槲皮素体外明显抑cinoma．PreventionofhepatocellularcarcinomaintheAsia-Pacific制肝癌SMMC一7721