槲皮素锌抗肿瘤作用及对hepg22的细胞凋亡诱导机制研究

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1、槲皮素锌抗肿瘤作用及对HepG22的细胞凋亡诱导机制研究【关键词】槲皮素；锌；金属配合物；抗肿瘤作用；细胞凋亡；HepG22　　Abstract：［Objective］TostudytheantitumorfunctionsandtumorcellapoptosisinducedbyQuercetinZn.［Methods］MTTassayoractivitiesofquercetinZninHepG2celllinesinvitro，andapoptoticcelletry.Theinvivoant

2、itumoractionoreofS180andH22mice.［Results］QuercetinZncaninhibitHepG2cellsfromgroetryshoiceandprolongthesurvivaltimeofH22mice.［Conclusion］QuercetinZnhasantiproliferativeandproapoptoticeffectontumorcellsinvivoandinvitro.　　Keyetalplexes；antitumor；cellapoptos

3、is；HepG22槲皮素（Quercetin，Que，3，5，7，3’，4’五羟基黄酮），广泛存在于多种植物中，尤以红麻叶和湖南连翘中含量较高，具有降血压、降血脂、抗炎、抗过敏、清除氧自由基和抗心律失常等多种生物活性及药理作用［1］。本课题组前期采用槲皮素与氯化锌反应合成了槲皮素锌配合物，发现其具有显著的抗氧化作用。本文旨在通过体内外抗肿瘤实验，进一步探讨其对肿瘤细胞的抑制作用，为其药物应用提供依据。　　1材料　　1.1仪器　　BS224S精密电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司。恒温CO2培养箱

4、，美国TEC公司。奥林巴斯CKX4132荧光倒置显微镜，日本Olympus公司。ClassⅡType/A/B2生物安全柜，美国Beker公司。低温超速离心机，美国Beckman公司。353酶标仪，美国TEC公司。　　1.2实验对象　　清洁级昆明小鼠，18～22g，由中国科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限公司提供，合格证号：SCXK（沪）20070005。S180、H22和HepG2细胞株，购自杭州昊天生物技术有限公司，本室常规传代保种。　　1.3主要试剂　　槲皮素，上海晶纯试剂有限公司

5、。氯化锌，温州化学用料厂。RPMI1640培养基，Gibco公司。胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司。5氟脲嘧啶（5Fu），上海旭东海普药业有限公司。四甲基偶氮唑蓝（MTT），Sigma公司。注射用环磷酰胺（CTX），江苏恒瑞医药股份有限公司。　　2方法　　2.1槲皮素　　锌配合物的合成将4mmol槲皮素加至50ml无水乙醇，60℃水浴搅拌至溶解，再加入3mmol的氯化锌，60℃回流6h，冷却，抽滤，并用10ml热无水乙醇洗涤几次，抽滤，真空干燥，得槲皮素锌配合物。　　2.2体内抗肿瘤实

6、验　　2.2.1对S180小鼠瘤重的影响。取昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分组，分别为模型对照组，CTX阳性对照组，槲皮素对照组，槲皮素锌配合物高、中、低剂量组。分组后连续ig给药3d，给药量为0.4ml/20g，模型对照组给同体积蒸馏水，阳性对照组给同体积5Fu（0.50g/kg）。第4天接种S180瘤株。取接种生长良好的S180荷瘤小鼠，无菌条件下抽取腹水，在冰浴条件下灭菌生理盐水与腹水按4∶1稀释，混匀制成肿瘤细胞混悬液。将制备好的S180肿瘤细胞混悬液按每只0.2ml接种于昆明种小鼠右侧腋

7、窝皮下。接瘤后继续给药7d。停药后第2天剥瘤、称质量，计算抑瘤率。抑瘤率=（对照组平均瘤质量-给药组平均瘤质量）/对照组平均瘤质量×100%　　2.2.2对H22小鼠生存时间的影响。小鼠分组、给药及接瘤方法同2.2.1项。接瘤后继续给药10d。停药后第2天开始观察记录各组小鼠的死亡数。各组小鼠全部死亡后，计算生命延长率。生命延长率=（给药组平均生存天数-对照组平均生存天数）/对照组平均生存天数×100%　　2.3体外抗肿瘤实验［2］　　2.3.1对HepG2增值的影响。取培养3～4d处于指数生长期的培养

8、细胞一瓶，加入适量的0.25%TrypsinEDTA液，使贴壁细胞脱落，用10%胚牛血清的RPMI1640培养基配成1×104个细胞/mL悬液。取96孔平板，每孔加细胞悬液100μl，置37℃、5%CO2及100%湿度培养箱中培养24h后，每孔加入不同浓度的槲皮素锌配合物，每个浓度设6个复孔，同时设溶剂对照组，槲皮素对照组。继续置培养箱培养24～72h。MTT用无血清RPMI1640培养基配成1mg/ml溶液，每孔加50μl，37℃温浴