表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人肝癌smmc

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1、表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人肝癌SMMC【摘要】目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）诱导人肝癌(SMMC-7721)细胞系，细胞凋亡的生物学效应。方法：通过MTT比色法检测EGCG对SMMC-7721细胞生长的影响；应用细胞计数法研究不同浓度EGCG对SMMC-7721细胞生长曲线的影响；PI染色流式细胞术研究EGCG对SMMC-7721细胞周期和凋亡率的影响。结果：EGCG显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长，呈浓度依赖性；SMMC-7721细胞经EGCG作用后，其细胞群体倍增时间明显延长，细胞增殖周期延长，从而细胞增殖速度减慢；流式细胞术分析结果表明EGC

2、G（30μg/mL、60μg/mL、120μg/mL）处理SMMC-7721细胞48h后，G1期细胞累积均逐渐增加。结论：EGCG具有诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用，其机制可能与使细胞周期G1期阻滞相关。【关键词】肝肿瘤；表没食子儿茶素没食子酸酯；细胞周期；凋亡　　AbstractObjective:Toinvestigatetheeffectofepigallocatechin-3-gallateoninductionofapoptosisinlivercancercelllineSMMC-7721.Methods:ThegroeasuredbyMTTassay.

3、CellcoutingmethodinedbyPIstainingfloetry.Results:EGCGsignificantlyinhibitedthegroanner.CellcountingshoeincreasedbyEGCGinaconcentrationdependentmanner.PIstainingfloetryshoanner.Conclusion:EGCGpossesesantitumoreffectinvitro,itsmechanismmightbeassociateds;Epigallocatechin-3-gallate;Cellcyle;Apo

4、ptosis　　肿瘤的发生与细胞凋亡有密切关系，细胞凋亡调控的失调是导致肿瘤形成的一个重要条件［１］。近些年，因为茶及其组分对人健康的潜在益处使得对茶的研究越来越广泛。绿茶含有特殊的多酚物质，主要是儿茶素。绿茶儿茶素中表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）含量最高而且生物活性最强，能明显抑制肿瘤细胞的生长。其具体机制尚不十分清楚，可能与其诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞细胞周期、诱导分化和抗肿瘤转移等有关［２］。利用EGCG处理不同的肿瘤细胞，均显示有较强的抑制肿瘤细胞增殖的效应。研究表明，EGCG对前列腺癌［３］、肺癌［４］、白血病［

5、５］、鼻咽癌、大肠癌、宫颈癌等肿瘤均有较强的抑制作用。肿瘤细胞的一个共同特征是细胞周期调控机制的破坏导致细胞的失控性生长。众多的癌基因、抑癌基因参与细胞生长、分裂、死亡的调控，最终表现为对细胞周期的调控。我们推测EGCG可能通过诱导SMMC-7721细胞周期阻滞而发挥其抑制增殖的效应。因此，本研究对EGCG进行了体外抗肿瘤活性测定,并应用流式细胞术分析其对肿瘤细胞周期的影响。　　1材料和方法　　1.1材料　　细胞及细胞培养：人肝癌细胞SMMC-7721由中科院上海细胞生物学研究所引进。用含10%新生牛血清的RPMI-1640培养液，在37℃，5%CO2混合气体,95%湿度的培养

6、箱内培养，取对数生长期细胞用于实验。　　药品与试剂：EGCG：Sigma公司产品，纯度95%。小牛血清：杭州四季青生物工程公司产品，MTT为Amresco公司产品。　　1.2方法　　1.2.1MTT比色法测定：取对数生长期细胞，接种于96孔平底培养板，每孔180μL(含0.9×104细胞)。培养6h后加入处理因素并设空白对照，使EGCG的终浓度为20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、120μg/mL每组设4个平行孔，继续培养48h。然后每孔加入MTT20μL（5mg/mL），4h后即终止培养，弃上清液，每孔加入200μLDMSO，振荡

7、摇匀，置酶联免疫检测仪在570nm波长处测量吸光度（A）值，按以下公式计算细胞增殖抑制率：抑制率=（1-试验组A值/对照组A值）×100%。　　1.2.2生长曲线及倍增时间测定：①取对数生长期细胞,常规胰酶消化制备单细胞悬液，调节细胞密度为2×104/mL，接种于24孔板,每孔1mL(2×104细胞/孔)，培养6h待细胞贴壁后分别加入处理因素并设空白对照，使EGCG的终浓度为20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL每个浓度设3个复孔,以上实验重复三次。