果蝇nulp1特异性多克隆抗体制备及检测.pdf

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1、2011年8月湖南师范大学自然科学学报Vo1．34No．4第34卷第4期JournalofNaturalScienceofHunanNormalUniversityAug．，2011果蝇nulpl特异性多克隆抗体制备及检测龚琳，王跃群，袁婺洲，莫小阳，万永奇，江志钢，吴秀山，李永青(湖南师范大学蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，中国长沙410081)摘要为了利用果蝇模型研究nulpl蛋白在早期心脏发育中的功能，采用PCR技术扩增出果蝇n咖1基因的部分编码区并插入到pET28a表达载体中．之后将重组质粒转入大

2、肠杆菌(Ecoli)Rosetta(DE3)；通过IPTG诱导表达His．nulpl融合蛋白，该融合蛋白采用Ni金属螯合层析纯化后，免疫新西兰兔制备了多克隆抗体，利用west．emblot对抗体进行分析．结果表明获得了高效价的特异性兔抗f-nulp1多克隆抗体．这为进一步研究果蝇心脏发育的分子机制创造了条件．关键词nulpl；果蝇；原核表达；多克隆抗体中图分类号Q78文献标识码A文章编号1000-2537(2011)04-0069-05PolyclonalAntibodyPreparationofNulplGeneinDrosop

3、hilaGONGLin，WANGYue—qun，YUANWu-zhou，MOXiao一，，WANy0ng—qi，JANGZhi-gang，唧Xiu—shah，一qing(TheCenterforHeartDevelopment，KeyLabofMOEforDevelopmentBiologyandProteinChemistry，HunanNormalUniversity，Changsha410081，China)AbstractTounderstandthefunctionofthenulplproteininearlyhear

4、tdevelopmentbyusingDrosophilaasamodel，here，afractionoftheencodedregionintheDrosophilanulplgenewasobtainedbyPCRamplification，andthenwasinsertedintopET28avectortoestablishtheexpressingsystem．Then，therecombinantplasmidwastrans—formedintoRosetta(DE3)，andthefusionproteinHi

5、s—nulplwasinducedbyIPTG．AfterpurificationbyNi¨metalchelatechromatography，His—nulplfusionproteinwasusedtoimmunetheNewZealandwhiterabbitstopre—parepolyclonalantibody．Theantibodywasassayedbywesternblottingandimmunohistochemistry．Theresultshowthatthepolyclonalantibodyisof

6、highsensitivityandspecificity．TheantibodywillfacilitatefurtherstudiesonthemolecularmechanismofheartdevelopmentinDrosophila．Keywordsnulpl；drosophila；prokaryoticexpression；polyclonalantibody已有研究表明：碱性螺旋一环一螺旋蛋白(basichelix—loop—helix，bHLH)是真核生物中的一种特殊的转录因子，它们在神经发生、肌细胞发生、心脏发

7、育和血细胞发生、癌症发生过程中发挥着重要的调节作用¨．nulpl蛋白包含一个bHLH和一个功能未知命名为DUF654的结构域．在小鼠等物种中均发现了它的同源蛋白，并且它们之间具有极高的保守度，说明此蛋白所在的亚家族可能具有相当重要的功能．在小鼠胚胎中发现该收稿日期：2010-12-26基金项目：国家自然科学基金资助项目(30930054，30871417，30971663)；国家重点基础研究发展计划资助项目(2005CB522505)；湖南省自然科学基金资助项目(09JJ5O14)}通讯作者。E．mail：xiushanwu@ya

8、hoo．corn；liyongqing2002cn@yahoo．corn．an湖南师范大学自然科学学报第34卷基因在肾脏，神经系统，和心脏中表达强烈，而在肝脏和皮肤中表达较弱【3J．作者所在研究室前期研究表明，JiI，t1在人类成体心脏发育晚期表达