犬γ干扰素多克隆抗体的制备及生物活性检测.pdf

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1、第43卷第12期东北农业大学学报43(12)：73~772012年12月JournalofNortheastAgriculturalUniversityDCO．2012犬干扰素多克隆抗体的制备及生物活性检测李一经，吴昱，唐丽杰，葛俊伟，乔薪瑗，崔文，姜艳平(东北农业大学动物医学学院，哈尔滨150030)摘要：将犬干扰素基因和表达裁体pET30a双酶切后构建了重组质粒pET30a—CalFN一^y，并转化到E．coliRosetta感受态中进行诱导表达。SDS—PAGE和Westernblot分析显示，重组蛋白约2

2、3ku并主要以包涵体形式存在。包涵体通过切胶纯化后肌注家免，制备出CaIFN—的抗血清，测得血清效价为1：12800。对复性后的包涵体通过细胞试验进行抗病毒活性检测，表明重组犬干扰素在终浓度为0．09mg·mL-时具有一定的抗病毒活性。本试验成功的原核表达、纯化了犬干扰素蛋白，制备CalFN一的抗血清，为CalFN一^y蛋白生物学特深入研究和生产应用奠定基础。关键词：犬IFN一-y；原核表达；抗病毒活性；多克隆抗体中图分类号：R392．1l文献标志码：A文章编号：1005—9369(2012)12—0073—05

3、PreparationofrabbitantiseraagainstCalFN-~andevaluationofCalFN-ybioactivity／LIYijing，WUYu，TANGLijie，GEJunwei，QIAOXinyuan，CUIWen，JI．ANGYanping(SchoolofVeterinaryMedicines，NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030，China)Abstract：ThecanineIFN—Ygenewasdigesteda

4、ndwasinsertedintoplasmidpET30atoconstructrecombinantplasmidpET30a—CalFN—V，thentherecombinantplasmidwastransformedintoE．coilRosetta．Therecombinantproteinwasexpressedafterinducing．SDS—PAGEandWestern—blotresultsshowedthattherecombinantproteinwasabout23kuandmainl

5、yinthefbrmofinclusionbodies．CalFN-VantiserumwasgeneratedbyimmunizingtherabbitwiththepurifiedrecombinantCalFN—Yproteinbygelisolation．ELISAresultshowedthattheserumtiterwas1：12800．Thebiologicalactivityofrenaturatedproteinwascheckedbycellexperiment．Cellexperiment

6、resultshowedthatCalFN—Ywiththeterminalconcentrationof0．09mg·mL。。possessescharacteristicofantivirus．TheexperimentsuccessfullyexpressedandpurifiedtheCalFN—YproteinandobtainedtheCalFN—Yantiserum，andprovidedareliablebasisforthefurtherstudyonCaIFN—Yproteinbiologic

7、alcharacteristicsanditsapplicationintheproductivepractice．Keywords：CalFN—Y；prokaryoticexpression；antiviralactivity；polyclonalantibodyIFN一为II型干扰素或免疫干扰素，主要由活Devos等克隆了犬IFN一基因嘲，夏春、汪明等也克化T淋巴细胞和NK细胞产生，是一种具有广谱抗隆过德国牧羊犬和拉布拉多犬IFN—Ot基因序列[3】。病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的分泌性蛋白，相2002年杨琪等

8、克隆了犬IFN一cDNA并在鼠骨髓瘤对于IFN一仪和IFN—p，IFN一相关研究较少。细胞(SP20)~进行了表达。IFN一具有抑制病毒复Hiummler等率先开始犬IFN—OL基因的研究_l1，随后制、抑制细胞分裂以及免疫调节作用嘲。主要表现收稿日期：2010—10—09基金项目：黑龙江省高校科技创新基金(2O11TDoo1)作者简介：李一经(1960-)，男，教授，博