甘蔗宿根矮化病菌多克隆抗体制备及初步检测.pdf

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1、l34广东农业科学2012年第1O期甘蔗宿根矮化病菌多克隆抗体制备及初步检测陈健文，杨湛端，刘睿，沈万宽，齐永文，何方洋，万宇平，余厚关，徐苑娴，邓海华(1．广州甘蔗糖业研究所／广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室，广东广卅I510316：2．北京望尔生物技术有限公司．北京102206)摘要：以纯化培养的甘蔗宿根矮化病(RSD)病菌作为抗原，免疫健康家兔，制备了RSD多克隆抗体。采用间接酶联免疫吸附试验检测其效价，并通过斑点酶标免疫法(Dotblotenzymeimmunoassays，DB—EIA)确定其工作浓度，同时与澳大利亚的抗体比较。结果表

2、明，制备的RSD多克隆抗体效价大于1：10000，在用DB—EIA法检测样本时的工作浓度以稀释10倍较好；与澳大利亚抗体的检测结果一致，但在印迹着色方面比澳大利亚的浅一些。试验结果表明，自制RSD抗体的效价略低于澳大利亚RSD抗体．但检测效果较好，可以满足今后在甘蔗生产上对RSD的检测要求。关键词：甘蔗宿根矮化病菌：多克隆抗体；制备中图分类号：Q一331文献标识码：A文章编号：1004—874X(2012)10—0134～03Preparationandpreliminarydetectionofpolyclonalantibodyagainst

3、thecausalagentofsugarcaneratoonstuntingdiseaseCHENJian-wen，YANGZhan-duan，LIURui，SHENWan—kuan，QIYong-wen，HEFang—yang，WANYu-ping，YUHou—mei，XUYuan-xian，DENGHai—huaf1．GuangdongKeyLabofSugarcaneImprovement＆Biorefinery,GuangzhouSugarcaneIndustryResearchInstituteGuangzhou510316，Chin

4、a；2．BeijingWangerBiotechnologyCo．Ltd,Beijing102206，China)Abstract：Inthepresentstudy，thecausalbacteriumofsugarcaneratoonstuntingdiseasewasisolated，purifiedandextensivelycultured，andthenusingasantigen，thepolyclonalantibodyspecificfortheRSDbacteriumwasproducedbyimmunizingtheheal

5、thyrabbitsinseveraltimes．Thetiterofthepolycfonalantibodywasdetectedusingindirectenzyme-linkedimmunoadsordentassay(ELISA)，andtheworkingdilutionproportionwasconfirmedbydotblotenzymeimmunoassays(DB—EIA)．Inaddition，thedetectioneffectofthisantibodywascomparedwiththatfromAustralia．

6、Theresultsshowedthatthetiterofthepolyclonalantibodyobtainedwasabove1：】0000．andthebestworkingdilutionproportionwas10folds．Moreover，theresultofthedetectionoffoursampleswasconsistentwiththeRSDantibodyfromAustralia，exceptthattheblottingcolorwasalittlelighter．Tosumup，thetiterofthe

7、RSDpolyclonalantibodypreparedinourstudywasalittlelowerthanthatoftheRSDpolyclonalantibodyfromAustralia，butwithsensitivedetectioneffect，andcouldbewellusedforthedetectionofRSDinthesugarcaneindustryinthefuture．Keywords：sugarcaneratoonstuntingdisease(RSD)；polyclonalantibody；prepar

8、ation甘蔗宿根矮化病(Ratoonstuntingdisease，RSD)是甘由于该病的病原菌难分离培养，使RSD诊断很困蔗生产上最