犬松弛素原多克隆抗体的制备

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2、＾（雅安市动物疫病预防控制中也）■——■■■■■？？、＇Ｖ．■学位类别兽医硕±、＂领域名称临床兽医学＊？．；马＾．、？—义．、？？研巧方向动物生殖内分泌与细胞工程—、、■？Ｉ－＇？＇＊．，，＇一．？．？‘．、＇＇ｙ．一．一卢２０ｖ、１５年５月Ｖ；－―＇’＇：寺－－食、、１、一＊＇獻Ｖ．＇’‘、一．＞，為．．－－斗、、－，、、．Ｖ；ｋ、，ＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏ

3、ＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＩｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆ化ｅ民ｅｕｉｒｅｍｅｎｔｆｂｒＭａｓｔｅｒＤｅｒｅｅｏｆｑｇＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＰｏｌｙｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙｏｆＣａｎｉｎｅＰｒｏｒｅｌａｘｉｎＸｉａＪｕａｎＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＳｈｕｍｉ打ＹｕＡｓｓｏｃｉａｔｅｒｏｆｅｓｓｏｒｐＹ’ａａｎＳｉｃｈｕａｎＣｈｉｎａ，，Ｍａ２０１５ｙ，本研究由国家自然科学基金（Ｎｏ．３１１７２３７９）和四川省学术与技

4、术带头人培养基金资助＊ＴｈｉｓｗｏｒｋｗａｓｓｕｐｐｏｉｔｅｄｂｙＴｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａＮｏ．３１１７２３７９ａｎｄｔｈｅＦｏｒｓｔｅｒｉｎＦｕｎｄｏｆ化ｅ（）ｇＡｃａｄｅｍ－ｉｃｔｅｃｈｎｏｌｏｌｅａｄｅｒｓｏｆＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅｇｙ论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成

5、果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：％么／Ｘ年＾月日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：；年月《曰！＞／玉＾尿导师签名：少年月／／甘

6、摘要松弛素（民ｅｌａｘｉｎ，艮ＬＸ）是由ＡＢ二链构成的短肋链激素，归属于族岛素家族。松弛素具有广泛的生理功能，包括生殖调控、舒张血管调节血循环、抗炎及促进炎性反应愈合等。目前对松弛素基因的研究主要集中在人、小鼠、猪等物种上，国外己克隆了犬前松弛素原（ｐｒｅｐｒｏｒｅｌａｘｉｎ）的基因序列，鉴于此，本研究ＲＴ－ＰＣ民Ｗ犬胎盘、卵巢组织为材料，应用技术获得多条犬前松弛素原基因ｃＤＮＡ，进行克隆并作生物信息学分析，同时构建犬松弛素原（ｐｒｏｒｅｌａｘｉｎ）原核，使其表达相应蛋白质表达载体，转化入大肠巧菌中。再将表达的重组蛋白免疫レッ制备多克

7、隆抗体新西兰兔。上述方法大程度的推动了松弛素的结构和功能的研究：。本研究具体如下１、犬前松弛素原基因的克隆和生物信息学分析ＲＴ－ＰＣ民技本研究北京犬和吉娃娃新生胎盘、贵宾犬卵巢为材料，采用术扩增前松弛素原基因，结果显示：本实验完整克隆了从所获样品中扩增到的预期一５３４１７，包含个ｂｐ的开放阅读框，编码７个氨基酸大小目的片段。将所扩増ｒｅｒｏｒｅｌａｉｎｃ片段进行序列分析显示，与ＮＣＢＩ核酸数据库检索的犬ｐｐｘ的ＤＮＡ序列同源性为９９．６％，均有３个核巧酸位点发生改变，从而引起相应氨基酸改变，一但并未引起蛋白结构的变化