果蝇血液标记基因srp原核表达质粒构建及多克隆抗体制备.pdf

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1、2011年8月湖南师范大学自然科学学报Vo1．34No．4第34卷第4期JournalofNaturalScienceofHunanNormalUniversityAug．，2011果蝇血液标记基因srp原核表达质粒构建及多克隆抗体制备鲁建鑫，雷孝锋，李帆，江志刚，吴秀山，万永奇’(湖南师范大学蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，中国长沙410081)摘要果蝇基因s是血液发育的早期标记基因，为了研究果蝇这一模式动物中血液发育的详尽过程，通过提取野生型成体果蝇的总RNA，反转录获得其cDNA文库，设

2、计引物克隆出srp基因，将所得片段插入原核表达载体pET28a中。经酶切和序列鉴定，成功构建重组质粒，并通过IPTG诱导表达出His-srp融合蛋白，经Ni·IDA凝胶柱纯化后，免疫新西兰大自兔制备srp多克隆抗体，为血液发育研究奠定了基础．关键词果蝇；srp；原核表达；多克隆抗体中图分类号Q78文献标识码A文章编号1000-2537(2011)04-0074-04ProkaryoticPlasmidConstructionandPolyclonalAntibodyPreparationofHematopoiesisM

3、arkerGeneSrpinDrosophilaLUJian—xin，LEIXiao-feng，LIFan，JIANGZhi—gang，WUXiu—shan’，WANYong—qi’(TheCenterforHeartDevelopment，KeyLabofMOEforDevelopmentBiologyandProteinChemistry，HunanNormalUniversity，Changsha410081，China)AbstractGenesrpiSahematopoiesismarkerinDrosoph

4、ila．ReservetranscriptionalPCRwasperformedU-singisolatedtotalRNAfromadultwildtype．ThepartfragmentofsrpcDNAsequencewasobtainedbyPCRampli-fication，clonedintopmkaryoticexpressionpET-28avectorandidentifiedwithrestrictionenzymeandsequencing．Thefusionproteinwasinducedb

5、yIPTG，thenpurifiedbyNi·IDAgelcolumn，andfinallyinjectedintoNewZeal-andwhiterabbitstogeneratepolyclonalantibody，whichlaysafoundationforblooddevelopmentalstudytoillumi-natetheelaborateprocessofhematopoiesisinDrosophila．KeywordsDrosophila；srp；prokaryoticexpression；p

6、olyclonalantibody果蝇作为生物学研究的经典的模式动物之一，具有生命周期短，繁殖力强，子代数量多以及便于进行表型分析等其他模式动物无法匹及的优势．近年来果蝇更广泛地被应用于人类疾病的研究¨J．哺乳动物由造血干细胞产生各种血细胞谱系，通过形成特异的转录因子蛋白复合体，调控细胞由一个谱系到另一个谱系的分化，而这个过程是由分子水平决定的．小鼠的基因失活研究已鉴定出许多重要的生血转录因子，如GATA一1对红细胞系统的发育、GATA-2对血液的完全发育、GATA-3对T细胞的发育J．在脊椎动物中，GATA家族的转录

7、调节因子在分化和组织发育中都呈现出保守的功能特性．GATA．1，GATA-2和GATA-3对于血液的发育是不可或缺的，同时有研究表明果蝇中的serpent(5)与脊椎动物中的Gata家族具有直接的同源性；值得注意的是，果蝇GATA的同源基因s对胚胎血细胞的发育是必不可少的】．果蝇的成熟血细胞分化为3种不同的类型，分别是胞质融合细胞、含晶细胞和扁平细胞[5】．在胚胎期果收稿日期：2011-03-25基金项目：国家自然科学基金资助项目(30900851)

8、I通讯作者-E-mail：xiushanwu@yahoo．corn；

9、wanyongqi@yahoo．eom．ca第4期鲁建鑫等：果蝇血液标记基因srp原核表达质粒构建及多克隆抗体制备75蝇血细胞首先从头部中胚层分化出来，并且能够在第5期通过GATA转录因子srp表达鉴定出来．srp表达的细胞被认为是血液前体细胞，是血细胞分化发育早期的一个标记基因．后期，srp又会与／zc引，usht共同调节果蝇血