果蝇唾液腺特异基因CG8419多克隆抗体的制备及检测.pdf

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1、第15卷第2期生命科学研究V01．15No．220l1年4月LifeScienceResearchApr．2011果蝇唾液腺特异基因CG8419多克隆抗体的制备及检测周煌，唐雄卓，闵璐，陈婷芳，彭夕洋，王琨，吴秀山王跃群(湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心，中周湖南长沙4l0081)摘要：果蝇CG8419基因与脊椎动物中豫45基因为同源基因．以果蝇cDNA为模板通过PCR扩增出亲水性和特异性好的果蝇CG8419基因片段．将其克隆入表达载体PET一28a，构建出重组表达质粒PET一28a—CG8419．将重组质粒转化大肠杆菌Rosett

2、a．经IG诱导出带His标签的重组融合蛋白．通过尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白．然后再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体．~Testernblot实验分别验证抗体的效价和特畀性．果蝇胚胎抗体染色显示该基因在果蝇唾液腺中表达．关键词：CG8419：原核表达：多克隆抗体中图分类号：Q71文献标识码：A文章编号：1007—7847(20l1)02—0l1l一04PreparationandDetectionofPolyclonalAntibodyCG8419ofSpecificGeneinDrosophilaSalivaryGlandZH0IJHuang，TANGXiong

3、—zhuo，MINLu，CHENTing—fang，PENGXi—yang，WANGKun，WUXiu—shan，WANGYue—qun(TheCenterforHeartDevelopment，KeyLabofMOEforDevelopmentBiologyandProteinChemistry，HunanNormalUniversit)．Changsha410081，Hunan，China)Abstract：CG8419inDrosophilaiStheorthologofTRIM45invertebrates．Thehydrophilicandwellspecif

4、icfragmentofDrosophilaCG8419wasobtainedwithPCRtechnology．ThenitwasclonedintotheexpressionvectorPET一28atoacquiretherecombinantexpressionplasmidPET一28a—CG8419．ItwastransformedintoEscherichiacoliRosetta，andHis—fusionproteinwasinducedwithIPTG．ThefusionproteinwaspurifiedbyUREAandsep—aratedbyS

5、DS—PAGEandrecoveredbygelextraction．WhiterabbitsoriginateinNewZealandwereimmunizedwiththeseparatedprotein，theantibodywasdetectedbyWesternblot．TheantibodystainingembryosinDrosophilademonstratethegeneexpressioninthesalivaryglands．Keywords：CG8419；prokaryoticexpression；polyclonalantibody(￡Sci

6、enceResearch，2011，15(2)：111～114)TRIM45基因在人类的肌肉、心脏、肝脏等组果蝇胚胎进行胚胎荧光抗体染色，发现其表达主织中有表达，提示该基因可能与肌肉和心血管组要在果蝇唾液腺中，也就是说CG8419基因是果织的发育有关．采用果蝇模型来研究其果蝇同蝇唾液腺特异表达基因，从而为深入研究其生物源基因CG8419的功能以便更好的研究该基因的学功能功能及其分子机制奠定了很好的基础．功能很有必要．在此情况下，我们制备出CG8419CG8419位于2号染色体28F1．28F2区段，多克隆抗体，用制备的CG8419兔多克隆抗体对该基因全长3207bp，含

7、5个外显子，2个内含收稿日期：2011．03．11；修回日期：2011-03—31基金项目：国家自然科学基金资助项目(30871340，31071999，90508004，30930054)；国家重基础研究发展计划资助项目(2005CB522505)作者简介：周煌(1987一)，女，湖南双峰人，硕士研究生，主要从事心脏发育的基因调控研究；通讯作者：吴秀L(1952．)，男，湖南衡阳人，湖南师范大学生命科学学院教授，博士，主要从事心脏发育基因凋控机理的研究，E—mail：xiushanwu@yahoo．com；王跃群(1964．)，女，湖南