云南少数民族地区乙型肝炎病毒功能基因变异特点分析-论文.pdf

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1、128心血管病防治知识2013年第l2期蠹论著交流云南少数民族地区乙型肝炎病毒功能基因变异特点分析苏文锦(云南省临沧市人民医院，云南临沧677000)【摘要】目的分析云南少数民族(以临沧市为例)HBV病毒功能基因的相关变异特点。方法选取临沧市少数民族地区2010年8月一2013年8月于我院确诊的HB患者3O例(研究组)，并选取同期汉族身份HB患者30例(对照组)，均采用PCR检测法进行基因情况测定，统计分析两组HBV功能基因的特点以及相关的变异特点。结果两组的病毒基因特点差异性不大，且基因的变异特点也无明显差别，前$2／S基因均在nt736A—G、nt192T—C、nt602T—C上出现替代

2、，且替代率相近；C基因均在B细胞和T细胞表位的32—60、84—106、138—152位间均出现aa变异，且变异率相近(P>0．05)。结论HBV的功能基因特点及变异性特点均无民族差异性，可参照汉族HBV的相关研究开展HB的研究和治疗。【关键词】云南；少数民族；HBV；基因变异；特点HB(乙型肝炎)在我国发病率很高，已成为十分另26例为CHB患者。两组患者的一般性临床资料严重的一种公共卫生问题，对诸多人群的健康产生对比后均显示无显著性差异(P<0．05)。威胁。另外，感染HB后，多数患者会逐步转变为1．2纳入标准CHB(慢性乙型肝炎)，而发生基因变异的HBV(乙均依据2000年中华医学会肝病

3、学分会于病毒肝病毒)即主要存在于CHB患者中，通过对CHB的肝炎的防治方案中制定的相关诊断标准确诊[；均HBV基因进行研究，并进而对基因的变异情况作研经PCR法检查后确定HBeAg、HBsAg、抗HBe以及究，利于乙型肝炎的更有效治疗f11。云南是我国少数抗HBc均为阳性；60例患者年龄均在l8周岁以民族最多的省份，拥有独特的气候以及地理环境，上；人组前半年均无抗病毒治疗史，且均无免疫调通过对该地域内少数民族HB感染者进行HBV功节剂使用史；患者均知情并自愿参与研究，且均符能基因变异情况的研究，利于根据少数民族人口的合伦理学相关标准。特点，更有针对性开展治疗。本文以临沧市的少数1．3检查方法

4、民族HB患者HBV功能基因的变异情况为例作具本文60例患者均使用PCR法测定。体探讨，情况如下。1．3．1试剂和仪器PCR纯化试剂盒产自Qiagen(德国)，PCR实时荧光定量检测仪器购自MJ公司1资料与方法(美国)，PCR9700型仪器购自PE公司(美国)；Hind1．1一般资料Ⅲ以及BamHI、T4连接酶等实验酶材料均购自选取临沧市少数民族地区2010年8月一2013Bi0labs(英国)；另外，PCR的检测使用HBV—DNA年8月于我院确诊的HB患者30例，列为研究组；专业试剂盒，核苷酸序列检测仪器购自ABI公司均为少数民族身份；其中，男18例，女12例；年龄(美国)，DBs克隆载体因

5、E．ColiTG1(大肠杆菌株)2l一67岁，平均(34．3+4．2)岁；其中，3例为慢性重型均为我院实验室重点保存。肝炎患者，另27例为CHB患者。同时，随机选取同1．3．2设计引物引物的设计参照文献[31逐一进行期在我院确诊的汉族身份HB患者3O例作参照，列设定，包括前$2／S基因的上游引物(P1：5^1、下游引为对照组；其中，男l9例，女11例；年龄20—69岁，物(P2：5^1以及C基因的上游引物(P3：5^1和下游引平均(34．7+4．6)岁；其中，4例为慢性重型肝炎患者，物(P4：51。作者简介：苏文锦，男，汉族，1962年出生，副主任检验师，毕业于昆明医科大学医学检验专业，从事

6、临床检验工作30年。心血管病防治知识2013年第12期1291．3．3PCR扩增采集所有患者的血清样本各2．2．3核苷酸序列情况前$2／S基因(862bp)长度2001~1，并使用HBV—DNA专业试剂盒进行HBV—中，研究组GC编码为416个氨基酸，占48．3％；对DNA提取，后与医用H20充分溶合后冷藏备用。然照组为414个氨基酸，占48．0％。研究组C基因后，使用HBV—DNA模板，将以上引物分别采用(546bp)长度中，Gc编码为247个氨基酸，占PCR扩增，并行空白样本对照；均使用琼脂糖凝胶45．2％；对照组为245个氨基酸，占44．9％；两组无明(1％)行电泳鉴定。相关反应参数：

7、72度延伸和再延显差别性(P>O．05)。分别将以上测定的前$2／S基因伸分别为1min、10min，55度退火为lmin，94度预变与c基因序列均录入基因Bank中；同时，与基因性和变性分别为5min和lmin。之后取401xlPCR扩Bank中的基因序列以及其亚序列分别进行对照，结增后产物与TE溶液充分溶合至200lxl，并加入果显示，研究组以及对照组60例患者的前$2／S基200txl氯仿，按照15oo