乙型肝炎病毒S基因的克隆-论文.pdf

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1、2f)14年临床血液学杂志27卷2期JClinHemato1(China)·101·乙型肝炎病毒S基因的克隆郝世勇聂华。祝成亮。[摘要]目的：对乙型肝炎病毒S基因进行克隆。方法：依据S基因两侧序列设计引物并引入酶切位点；聚合酶链式反应(PeR)扩增目的基因；对PeR产物和载体质粒pCMV-tag2B分别作EcoRI和HindUl双酶切后，T4连接酶连接；将连接产物转化为大肠杆菌DH5a；增菌培养后提取重组质粒；对重组质粒作PeR、酶切及测序鉴定。结果：PCR扩增出目的基因片段；目的片段与载体连接后成功；获得含重组质粒的DH5a阳性克隆

2、；经鉴定和测序，重组质粒含有完整正确的s基因序列。结论：成功构建了s基因的克隆载体，获得大量s基因片段，为研究s基因对HBsAg检测的影响奠定了基础。[关键词]乙型肝炎病毒；S基因；克隆doi：10．1320l／j．issn．1004—2806～b．2014．02．006[中图分类号]R512．6[文献标志码]ACloningofHBVSgeneHA0S^iyongNIEHua。ZHUChengliang。(XiangyangCentralHospital，Xiangyang，441021，China；XiangyangCityBlo

3、odBank；。People'sHospitalofWuhanUniversity)Correspondingauthor：ZHUChengliang，E—mail：15971169059@163．cornAbstractObjective：ToclonetheHBVSgenetoprovidegeneticmaterialsforthestudyofassociationbe—tweenSgeneandHBsAgdetection．Method：BasedonthebothsidesequenceoftheSgene，apairof

4、primersweredesignedandrestrictionendonucleasesiteswereintroduced．TargetfragmentwasamplifiedbyPCR．BoththePeRproductsandplasmidpCMV-tag2BweredoubledigestedbyrestrictionenzymeEcoRIandHindHI，andthenliga—tedusingT4DNAligase．Therecombinantplasmidwastransformedintothecompetent

5、cellsofE．coliDH5d．Af-terthecellsculturedfor14hours，recombinationplasmidswereextractedandpurified．TheclonedSgenewasiden—tifiedbyPCR，restrictiondigestionandDNAsequencing．Result：ThetargetSgenefragmentwasamplifiedbyPeRandinsertedintoplasmidvectorpCMV-tag2Bsuccessfully．E．col

6、iDH5aclonescontainingrecombinatedplasmidwereselected．TherecombinatedplasmidcarriedcorrectandcompleteSgenesequence．Conclusion：ThecloningVC—torcarryingSgeneissuccessfullyconstructed．AlotofSgenefragmentsareharvestedwhichmaybenefitthefu—tureresearch．KeywordsHBV；Sgene；clonin

7、g乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球性的健康问公司；T4连接酶购自Promega公司；B型超纯小量题，而乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是HBV感质粒快速提取试剂盒由北京博大泰克生物基因技染最重要的血清学标志物。HBsAg由226个氨术有限公司提供；DNA胶回收试剂盒由Ferments基酸残基组成，为病毒的s基因所编码。研究表公司提供；所用琼脂糖凝胶购自英国OXI()D公司；明，S基因的基因型和变异均可改变HBsAg的抗其余LB培养液和TAE电泳缓冲液均为本室配原性，从而影响HBsAg免疫学检测结果的准确制。性一朝。本实验对s基因进行

8、体外克隆，为研究s1．1．2主要仪器PeR扩增仪(美国PE公司)；基因对HBsAg检测的影响奠定基础。ZF型紫外透射分析仪(上海康华生化仪器制造1材料与方法厂)；全自动凝胶成像及分析系统(法国VI公司)；1．1试剂与仪器