应用MGB探针检测人乙型肝炎病毒的基因型-论文.pdf

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1、分子诊断与治疗杂志2014年7月第6卷第4期JMolDiagnTher，July2014，Vo1．6No．4·论著·应用MGB探针检测人乙型肝炎病毒的基因型陈泽惠李欣钰z肖湘文z丁渭z刘淑园：陈华云zt[摘要]目的检测血浆或血清样本中人乙型肝炎病毒I-IBV的基因型，建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HBV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PcR引物及探针，为保证特征特异性及高分辨率，选择设计MGB探针，然后将PCR扩增的产物纯化后进行基因克隆，克隆成功后提取的质粒制备为阳性质控品，从而建立完整的MG

2、B探针法的荧光定量PCR检测体系，最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HBV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示，该检测体系的灵敏度达50IU／mL；重复性好；特异性良好，以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HBV荧光定量PCR的基因分型检测方法，可以很好地定性的检测血浆或血清样本及血液制品中的人乙型肝炎病毒HBV的基因型及含量，对于该疾病的临床治疗具有重要的意义。[关键词]乙型肝炎病毒HBV；MGB探针；荧光定量PCRApplytheMGBp

3、robetodetectHBVvirusgenotypingofthepeopleCHENZchui，LIXinyu2，XIAOXiangwen，DINGWei2，LIUShuyuan2，CHENHuayun2(1．ThePeople’SHospitalofYunmengCountyinXiaogan，Hubei，Wuhan432500，China；2．GeneDiagnosisCenterofZhongshanUniversity，Guangdong，Guangzhou510665，China)[ABSTRACT]Object

4、iveAReal-TimePCRassaybasedontheMGBprobefordetectinggenotypesofhepatitisBvirusexistedinplasmaorserumsampleswasbuilt．MethodsToensurethespecificityandhighresolution，theprimerandprobeofReal—TimePCRofHBVwasdesignedintheareaswhichgenometypeconcentrated．Toevaluatethemethodo

5、logyfortheReal-TimePCRdetectionsystemoftheMGBprobe，weconstructedplasmidsasthepositivequalityproductstobuildcompletedetectionsystem．ResultsThedetectionsystemofHBVgenotypesofReal-TimePCRbasedontheMGBprobewasestablishedsuccessfully．Methodologicalevaluationshowedthatthes

6、ensitivitywasupt0501U／mLandrepeatabilityisexcellent．Thetestsofavarietiesofplasmavirusnucleicacidwerenegativet0revealhighspecificity．ConclusionAdetectionmethodsbasedontheMGBprobeofHBVgenotypesofReal—TimePCRwasbuilttodetecthepatitisBvirusgenotypeandthecontentofblood，pl

7、asmaorserumsamples．ThesystemisofgreatimportancefortheclinicaltreatmentofHBVvirus．[KEYWORDS]HepatitisBviruses；MGBprobe；Real—timePCR乙型肝炎病毒(HBV)是一种DNA病毒，可引主的筛选致使HBV分为A~H8个基因型E]，且起人类肝脏病变，是造成肝硬化、肝癌及慢性肝炎HBV基因型具有区域分布特征[71引。有研究报道，发生的主要原因[1-4]。由于该病毒的突变及对宿人类感染HBV后的临床病程及治疗效应与其基

8、基金项目：国家“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项(2012ZX10002005)作者单位：1．孝感市云梦县人民医院输血科，湖北，孝感4325002．中山大学达安基因诊断中心，广东，广州510665通讯作者：陈华云。E—mail：huayunche