基于分子倒置探针的乙型肝炎病毒耐药基因单碱基突变检测技术的建立-论文.pdf

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1、医学杂志2014年5月第37卷第5期ChinJLabMed．May2014，Vol_37．No．5·337·．论著．基于分子倒置探针的乙型肝炎病毒耐药基因单碱基突变检测技术的建立唱凯贾双荣潘锋李发科王丰鲁卫平邓少丽陈呜【摘要】目的建立一种检测乙型肝炎病毒耐药基因单碱基突变的分子倒置探针(MIP)检测技术。方法方法学建立。收集第三军医大学大坪医院检验科分离的乙型肝炎病毒(HBV)耐药突变YVDD的野生株和突变株DNA。以HBV耐药基因突变YVDD为研究对象，建立针对该基因突变位点的MIP检测技术。分别采用构建的MIP技术和测序技术对1例HBV耐药突变YVDD野生株和1例突变株进行检测，通

2、过比较MIP技术和测序技术的检测结果，明确MIP技术在临床标本检测中的准确性。结果MIP技术用于单碱基突变检测时采用TaqDNA连接酶和AmpligaseDNA连接酶进行热循环单碱基延伸及连接反应可保证检测的特异性。MIP检测技术的最佳探针浓度为1nmol／L。通过对不同浓度靶序列的检测确定MIP技术的检测灵敏度为1nmol／L。临床标本初步验证发现，MIP技术检测结果与测序方法结果一致。结论成功建立了检测HBV耐药基因单碱基突变的MIP技恭o(中华检验医学杂志2014，37：337-341、【关键词】肝炎病毒，乙型；抗药性，病毒；分子探针技术；基因型；多态性，单核苷酸Molecula

3、rinversionprobe-basedsinglebasemutationsofhepatitisBvirusresistancegeneanalysisChangKai，JiaShuaagrong，PanFeng，LiFake，WangFeng，We~ing，DengShaoli，ChenMing．DepartmentofClinicalLaboratoryMedicine，InstituteofSurgeryResearch，DapingHospital，theThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400042，ChinaCorresp

4、ondingauthor：Chen几g，Email：chenming1971@yahoo．corn【Abstract】ObjectiveToestablishamolecularinversionprobe(MIP)methodfordetectionofsinglebasedrug．resistancemutationinHepatitisBvirus(HBV1gene．MethodsTheHBVwildtypeandYVDDmutantstrainwereisolatedbyDapingHospitaloftheI’hirdMilitaryMedicalUniversity．The

5、MIPwasdesignedandappliedtodetecttheHBVdrug—resistanceYVDDmutationinonecaseofwildtypeandonecaseofYVDDmutantHBVstrainisolatedpreviously．TheresultsofMIPme山odwerecomparedwiththatofsequencingtoeva1uatethedetectionaccuracy．ResultsThermalcyclingsingle—baseextensionandconnectionreactionperformedbyTaqDNA

6、LigaseandAmpligaseDNALigasecouldensurethespecificityofthedetecti0n．TheoptimumprobeconcentrationofMIPwas1nmoVL．Throu【ghdetectionofthetargetgenewithdifferentDNAconcentrations．thedetectionsensitivityofMIPwasdeterminedas1nmo1／L．TheresultsofMIPwereconsistentwiththatofsequencingmethodindetectionofthec

7、linicalsamples．ConclusionMIPissuccessfullyusedtodetectsingle—basedrug—resistancemutationinHBVgene．(ChinJLabMed，2014，37：337—341)【Keywords】HepatitisBvirus；Drugresistance，viral；Molecularprobetechniques；Genotype；Polymorphism，sin