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《采用TaqMan MGB探针定量检测HCV 1b基因型C区氨基酸70变异-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华实验和临床病毒学杂志2014年8月第28卷第4期ChineseJExpClinViral,August2014,Vo1.28,No.4·305·.技术方法.采用TaqManMGB探针定量检测HCVlb基因型C区氨基酸7O变异胡中杰,刘颖,仇丽霞,范作鹏,聂巍,梁珊【摘要】目的建立一种定量检测HCV1b基因型C区氨基酸7O位点主要野生株(Arg-CGG,70W)和变异株(Gln-CAG,70M)的方法。方法设计一对分别针对70W和70M的TaqManMGB探针,建立一种实时逆转录聚合酶链反应定量检测方法。验证方
2、法的敏感性、特异性和准确性。结果所设计的引物和探针具有良好的特异性,敏感性可达5拷贝/反应。进一步的克隆测序证实了新方法的可靠性。结论建立了一套HCV1b亚型c区氨基酸70变异的定量检测系统,具有较高的敏感性、特异性和准确性,为研究70w和7OM在抗病毒治疗中的动态变化提供了技术手段。【主题词】肝炎病毒属;逆转录聚合酶链反应;DNA探针,MGBEstablishmentofaquanti覃Icati0nmathodfortheaminoacid70substitutioninthecorere-#onofhepa
3、titisCvirusgenotypelbZhongj~,Liuyi,QiuLixia,FanZuopeng,Nief,LiangShan.‘DepartmentofHepatitisC&ToxicLiverDiseases,Be彬ngYouanHospital,CapitalMedicalUniversity,eng100069。ChinaCorrespondingauthor:肌Zhongjie,Email:yfcyt@139.cam【Abstract】0bjectivoTodeveloparapidands
4、ensitivemethodtoquanti~thesubstitutionofaminoacid(aa)70inhepatitisCvirus(HCV)genotypelhcoreregion.MethodsSpecificprimersandTaqMan-minorgroovebinderprobesweredesignedtoestablisharealtimereversetranscription-polymerasechainreactionforaa70substitution.Thespecifi
5、city。sensitivityandaccuracyofthesystemweretested.ResultsTheprobescouldclearlydistinguish70Wand70M.Thedetectionlimitforeachsystemwas5copies/reaction.Furthertestsusingcloningsequencingconfirmedthereliabilityofthedetectionsystem.ConclusionsAnovelsystemwasdevelop
6、edandprovidesaneffoctive,sensitive,andaccurateapproachtoquantifythewildtypeandmutantstrainsofHCV1bcoreregionanT0.【Keywords】Hepatitisviruses;Reversetranscriptionpolymerasechainreaction;DNAprobes,MGB慢性丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)感显示,在影响IFNct抗HCV作用的宿主因素和病毒染是一个严重的
7、社会和公共卫生问题。聚乙二醇干因素中,白介素28BSNPs、C区(CRegion,CR)氨基扰素at(pegylatedinterferon,PEG-IFN.at)联合利巴韦酸(aminoacid,aa)70替代(R70Q/H)和IFN敏感决林(ribavirin,RBV)是近十年来治疗慢性丙型肝炎定区基因变异点数量与GT一1型感染者的SVR最相(chronichepatitisC,CHC)的最佳药物,也是当前的关⋯,CRR70Q/H也是telaprevir/PEG—IFN/RBV三标准治疗方案。但HCV基因1型
8、(genotype-1,GT-联治疗NVR的独立相关因素。但CRR70Q/H1)感染患者的持续病毒学应答(sustainedvirologic变异影响IFN疗效的机制尚不清楚,如野生株和变response,SVR)率仅为40%一50%。大量临床研究异株在IFNa治疗过程中的动态变化规律如何?变异株是否产生于药物的选择压力?要了解这些情DOI;10.3760/cma.j.i
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