采用TaqMan MGB探针定量检测HCV 1b基因型C区氨基酸70变异-论文.pdf

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1、中华实验和临床病毒学杂志2014年8月第28卷第4期ChineseJExpClinViral，August2014，Vo1．28，No．4·305·．技术方法．采用TaqManMGB探针定量检测HCVlb基因型C区氨基酸7O变异胡中杰，刘颖，仇丽霞，范作鹏，聂巍，梁珊【摘要】目的建立一种定量检测HCV1b基因型C区氨基酸7O位点主要野生株(Arg-CGG，70W)和变异株(Gln-CAG，70M)的方法。方法设计一对分别针对70W和70M的TaqManMGB探针，建立一种实时逆转录聚合酶链反应定量检测方法。验证方

2、法的敏感性、特异性和准确性。结果所设计的引物和探针具有良好的特异性，敏感性可达5拷贝／反应。进一步的克隆测序证实了新方法的可靠性。结论建立了一套HCV1b亚型c区氨基酸70变异的定量检测系统，具有较高的敏感性、特异性和准确性，为研究70w和7OM在抗病毒治疗中的动态变化提供了技术手段。【主题词】肝炎病毒属；逆转录聚合酶链反应；DNA探针，MGBEstablishmentofaquanti覃Icati0nmathodfortheaminoacid70substitutioninthecorere-#onofhepa

3、titisCvirusgenotypelbZhongj~，Liuyi，QiuLixia，FanZuopeng，Nief，LiangShan．‘DepartmentofHepatitisC&ToxicLiverDiseases，Be彬ngYouanHospital，CapitalMedicalUniversity，eng100069。ChinaCorrespondingauthor：肌Zhongjie，Email：yfcyt@139．cam【Abstract】0bjectivoTodeveloparapidands

4、ensitivemethodtoquanti~thesubstitutionofaminoacid(aa)70inhepatitisCvirus(HCV)genotypelhcoreregion．MethodsSpecificprimersandTaqMan-minorgroovebinderprobesweredesignedtoestablisharealtimereversetranscription-polymerasechainreactionforaa70substitution．Thespecifi

5、city。sensitivityandaccuracyofthesystemweretested．ResultsTheprobescouldclearlydistinguish70Wand70M．Thedetectionlimitforeachsystemwas5copies／reaction．Furthertestsusingcloningsequencingconfirmedthereliabilityofthedetectionsystem．ConclusionsAnovelsystemwasdevelop

6、edandprovidesaneffoctive，sensitive，andaccurateapproachtoquantifythewildtypeandmutantstrainsofHCV1bcoreregionanT0．【Keywords】Hepatitisviruses；Reversetranscriptionpolymerasechainreaction；DNAprobes，MGB慢性丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)感显示，在影响IFNct抗HCV作用的宿主因素和病毒染是一个严重的

7、社会和公共卫生问题。聚乙二醇干因素中，白介素28BSNPs、C区(CRegion，CR)氨基扰素at(pegylatedinterferon，PEG-IFN．at)联合利巴韦酸(aminoacid，aa)70替代(R70Q／H)和IFN敏感决林(ribavirin，RBV)是近十年来治疗慢性丙型肝炎定区基因变异点数量与GT一1型感染者的SVR最相(chronichepatitisC，CHC)的最佳药物，也是当前的关⋯，CRR70Q／H也是telaprevir／PEG—IFN／RBV三标准治疗方案。但HCV基因1型

8、(genotype-1，GT-联治疗NVR的独立相关因素。但CRR70Q／H1)感染患者的持续病毒学应答(sustainedvirologic变异影响IFN疗效的机制尚不清楚，如野生株和变response，SVR)率仅为40％一50％。大量临床研究异株在IFNa治疗过程中的动态变化规律如何?变异株是否产生于药物的选择压力?要了解这些情DOI；10．3760／cma．j．i