麻疹病毒HA基因克隆和表达的研究.pdf

《麻疹病毒HA基因克隆和表达的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、中国卫生检验杂志2013年9月第23卷第11期ChinJHealthLabTec，Sep2013，Vol23，No11·实验研究·麻疹病毒HA基因克隆和表达的研究姚栩，陈智伟，刘树韬，黄晓霞1．福州市疾病预防控制中心，福建福州350005；2．福州大学生物工程与科学学院，福建福州350009摘要：目的构建麻疹病毒血凝素蛋白基因的重组质粒，使其在大肠埃希菌中表达HA蛋白，为麻疹病毒诊断奠定基础。方法从麻疹病毒株MV07—30中提取核糖核酸，用RT—PCR扩增HA基因，用限制性内切酶BamHI和HindⅢ双酶切HA基因片段和pGEM—T

2、easy载体，连接后获得重组质粒pGEM—Teasy—MVHA并克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)；用IPTG诱导重组质粒在大肠杆菌BI21(DE3)中进行表达；利用SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术进行重组蛋白表达的分析；通过Ni—NTA亲和层析获得高纯度目的蛋白。结果RT—PCR获得的HA基因片段约长1700bp。转化的大肠杆菌表达产物在SDS—PAGE中出现与目的蛋白分子量相一致的条带，且重组蛋白主要以包涵体形式存在；血凝及血凝抑制实验显示表达产物具有良好的抗原性。结论构建麻疹病毒HA基因的原核表达体系，纯化的重

3、组蛋白可用作麻疹病毒检测的抗原。关键词：麻疹病毒；血凝素；基因克隆；原核表达中图分类号：R511．1文献标识码：A文章编号：1004—8685(2013)11—2481—04StudyoncloningandexpressionofmeaslesvirushemagglutiningeneYAOXu，CHENZhi—wei，LIUShu—tao，HUANGXiao—xiaFuzhouCenterforDiseaseControlandPrevention，Fuzhou350005，ChinaAbstract：0bjectiveToc

4、onstructrecombinantplasmidpGEM——Teasy——MVHAandexpressthehemagglutiningeneofmen-·slesvirusinEscherichiacoliexpressionsystem，inordertolayafoundationfordiagnosisofmeaslesvirus．MethodsMeaslesvirusgenomicRNAwasextractedfromthestrainMV07—30，theinterestHAgenewasamplifiedbyRT—

5、PCR．AfterdigestedbyBam—HIandHind—menzymes，thepGEM—Teasy—MVHAwasinsertedintoexpressionplasmidpET28a(+)vector，therecombinantplasmidwastransformedintoE．coliBL21(DE3)cellsandinducedbyIPTG．TheexpressionofHAproteinwasan—alyzedbySDS—PAGE．Thentherecombinantproteinwaspurifiedwi

6、ththeNi—NTAcolumn．ResultsTheinterestgeneam-plifiedbyRT—PCRwas1700bp．TheinterestproteinwasexpressedininclusioninEscherichiacoliexpressionsystem，andshowedthehighantigenicityinWesternblotting．ConclusionTheinterestproteinwassuccessfullyexpressedinprokaryoticsystem，andcanbe

7、usedastheantigeninmeaslesvirusdetectionafterpurification．KeyWords：Measlesvirus；Hemagglutinin；Genecloning；Prokaryoticexpression麻疹是由麻疹病毒引起的以发热、全身斑丘疹为号转导淋巴细胞激活分子SLAM作用主要位点，同时特征的急性病毒性传染病，该病传染性强，危害大，发还能与病毒包膜表面的融合蛋白相互作用。研究病严重时可引起死亡，严重危害儿童健康。自麻疹减表明HA基因的突变直接导致麻疹病毒血凝集性，细毒活疫苗使用以

8、来，其发病率、死亡率大为下降，但麻胞毒性反应，病毒与受体相互作用等诸多方面的变疹仍是严重威胁儿童健康的公共卫生问题之一。麻化，从而直接影响感染者对麻疹病毒免疫力的变疹病毒(MV)是一种单股负链核糖核酸病毒，属副粘化J。本研究利用大肠杆