基因克隆及克隆基因的表达

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1、吉林大学白求恩医学院分子生物学教研室讲师孙巍Tel:0431-856193692012-10基因克隆、克隆基因的表达荧光蛋白基因克隆猫科学家复活冰冻死老鼠修正基因蚊子防控疾病基因转换让蝌蚪长出三颗眼睛基因克隆胚芽造就健康婴儿基因克隆趣闻www.themegallery.com荧光蛋白基因克隆猫具有荧光蛋白基因的克隆猫在紫外线照射下会变色由韩国科学技术部公布的对比照片显示出3只具有荧光蛋白基因的克隆猫（上图为普通光线照射下，下图为紫外线照射下）www.themegallery.com科学家复活冰冻死老鼠一只老鼠死亡后被冷冻了16年之久,日本科学家从其体内提

2、取基因克隆了一只新老鼠,这是人类首次成功克隆冷冻动物。www.themegallery.com修正基因蚊子防控疾病科学家把一种可防疟疾的基因植入蚊子基因之中,对蚊子基因进行修正。在实验中,科学家们不仅仅在蚊子体内植入了防疟疾基因,还植入了另一种可以使蚊子眼睛发出荧光的基因。这样,科学家就可以很容易识别它们。www.themegallery.com基因转换让蝌蚪长出三颗眼睛2007年,英国科学家在实验室中利用基因转换技术成功地在蝌蚪头部培育出第三颗眼球。这个消息对盲人来说是一个天大的喜讯。利用这种技术,干细胞科学家们真的有可能实现他们再造眼球的梦想。www

3、.themegallery.com基因克隆胚芽造就健康婴儿基因的秘密随着科技的日益发达而被逐渐揭开。血友病、色盲、白化病……这些遗传病困扰着一个又一个家庭，也激励着一代又一代科学家为之奋斗。www.themegallery.com分子生物学关键的技术突破：DNA重组技术1972年，世界上第一个重组DNA分子诞生PaulBergabiochemistryatStanford猿猴病毒DNA噬菌体DNA限制性内切酶限制性内切酶DNA连接酶重组DNA分子1980年，获诺贝尔化学奖www.themegallery.com克隆：通过无性繁殖过程所产生的与亲代完全

4、相同的子代群体。moleculeCellcolonyorganismDNAclone基因克隆:是指来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构建成新的重组DNA，然后送入受体生物中去表达，从而产生遗传物质转移和重新组合。www.themegallery.com一、目的DNA的分离获取（分）；二、载体的选择与准备（择）；三、目的DNA与载体连接（接）；四、重组DNA转入受体细胞（转）；五、重组体的筛选与鉴定（筛）。DNA克隆的过程包括五个基本部分：www.themegallery.com一、目的DNA的分离获取（分）分离获取目的DNA有

5、多种方法：(一)PCR——待扩增目的基因两端序列已知（据此设计引物）(二)基因文库——先构建，后筛选(三)化学合成法——直接合成目的DNA（序列已知、片段较短）www.themegallery.com随机打碎：物理方法缺点：难以重复；获得的DNA量少等。www.themegallery.com限制性核酸内切酶的发现1970年，第一个限制性核酸内切酶定点剪切DNA操作DNA1978年，获诺贝尔生理学或医学奖限制性核酸内切酶——用于切割DNAwww.themegallery.com限制性核酸内切酶Restrictionendonuclease可分为Ⅰ、Ⅱ、

6、Ⅲ型，分子生物学中通常使用的是Ⅱ型：能在DNA双链内部的特异位点识别并切割DNA，“分子剪刀”GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+BamHⅠ核酸水解酶，裂解磷酸二酯键。www.themegallery.comⅡ型限制性内切酶具有一些共性和特性：1.具有特定的识别和切割位点限制性内切酶识别位点限制性内切酶识别位点ApaIGGGCC’CC’CCGGGSmaICCC’GGGGGG’CCCBamHIG’GATCCCCTAG’GSau3AIGATC’’CTAGPstICTGCA’GG’ACGTCNotIGC’GGCCGCCGCCGG’CGEcoRIG

7、’AATTCCTTAA’GSfiIGGCCNNNN’NGGCCCCGGN’NNNNCCGGII型限制性内切酶的识别位点举例（'示切割位点）识别位点通常为6或4碱基序列www.themegallery.com2.识别的核苷酸序列通常为回文结构（palindrome）两条核苷酸链中，从5’到3’方向的核苷酸序列完全一致Ⅱ型限制性内切酶具有一些共性和特性：www.themegallery.com3.切割双链DNA分子后产生黏端或平端BamHⅠGTCCAGGCCTAGGATCCG+GGATCCCCTAGGHindⅡGTCGACCAGCTGGACCTG+平端切口黏

8、端切口（stickyend）（bluntend）Ⅱ型限制性内切酶具有一些共性和特