PITC柱前衍生HPLC测定复方氨基酸注射液中18种氨基酸的含量-论文.pdf

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1、2014第十六卷第六期．Vo1．16No．6PITC柱前衍生HPLC测定复方氨基酸注射液中18种氨基酸的含量六汪媛，王海龙，金高娃，章飞芳，杨丙成，梁鑫淼，。(1．华东理工大学药学院上海200237；2．吕梁学院吕梁033000；3．中国科学院大连化学物理研究所大连116023)摘要：目的：建立柱前衍生高效液相色谱法同时测定复方氨基酸注射液(18AA)中18种氨基酸含量的方法。方法：样品采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生，以Unitary—C】8柱(250mmx4．6mm，5Ixm)为色谱柱，检测波长为2

2、54nm，醋酸钠缓冲盐及乙腈、甲醇和水的混合体系为流动相，梯度洗脱。结果：优化了衍生试剂用量、衍生时间、缓冲盐浓度以及pH值和柱温等影响因素，最终在40min内实现了18种氨基酸的分离，在9～1021Ixg·mL浓度范围内线性关系良好，且相关系数大于0．9977，平均回收率为92．6％～11O．7％，相对标准偏差(RSD)为0．0l％～5．68％。其定量限(LOQ，S／N=10)为0．0213．41txg·mL～。结论：该方法操作简便、灵敏度高、准确度和精密度好，可用于复方氨基酸注射液中氨基酸的含量测定。关

3、键词：柱前衍生异硫氰酸苯酯高效液相色谱法复方氨基酸注射液doi：10．11842／wst．2014．06．025中图分类号：R284．1文献标识码：A氨基酸可进入组织细胞，参与蛋白质的合成代制其推广应用。间接分析法则需要将其衍生成具有谢，获得正氮平衡，并生成酶类、激素、抗体、结构紫外响应r5】或荧光吸收f6]的衍生物。其中柱后衍生法蛋白，促进组织愈合，恢复正常生理功能⋯。复方氨是利用氨基酸在酸性条件下形成阳离子而在阳离基酸注射液(18AA)是一类含有较高浓度的氨基酸子交换柱中分离，再对分离后的氨基酸进行衍生

4、检类药物，其种类很多，其中包含人类所需的各种氨测。但由于衍生反应需在特定反应器中，常造成色基酸【21，因此对其氨基酸含量的控制非常重要。谱峰展宽，使分离度降低1。而柱前衍生高效液相色目前多种氨基酸同时检测方法有很多，由于大谱法因其具有快速、灵敏，仪器实用性更广的优点多数氨基酸没有芳香环等生色团无法直接采用紫逐渐成为氨基酸检测的首要选择_8]。目前常用的柱外或荧光检测器检测，因此其检测方法可分为直接前衍生试剂有邻苯二甲醛(OPA)t】、芴甲氧羰酰氯分析法11和间接分析法l41。直接分析法通常采用高效(FMOC

5、—C1)、异硫氰酸苯酯(PITC)⋯，1、丹磺酰氯阴离子交换色谱一积分脉冲安培检测法，此法可同(Dansyl—C1)和6一氨基喹啉一N一羟基琥珀酰亚胺时对一级和二级氨基酸进行检测，无需柱前或柱后基甲酸酯(AQC)等，以及一些合成的新型衍生试衍生，直接进样，分离效果好、灵敏度高、操作简单。剂『l3，]，但无论是商品化的还是实验室合成的衍生但此类氨基酸分析仪专属性强，价格昂贵，大大限试剂都有其各自的优缺点：OPA衍生法速度迅速，但不能同时衍生一、二级氨基酸且衍生产物不稳收稿日期：2013一ll一25修回日期：2

6、014—06—19★国家自然科学基金委面上项目(21177040)：基于分子印迹聚合物固相微萃取原亲水液相色谱分离的氨基糖苷类抗生素残留快速筛查技术研究负责人：章飞芳★★通讯作者：章飞芳，副教授，硕士生导师，主要研究方向：药物分离分析方法。1347(WorldScienceandTechnology~ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica]世界科学技术一中医药现代化★中药研究定；FMOC—C1衍生法速度较快，产物稳定，但试剂本溶液2

7、00L，加入800IxL水，混匀待测。复方氨基身和水解产物会干扰分析；PITC衍生法产物单一、酸注射液用HC1溶液稀释10倍后按上述方法制备。稳定，但残余的衍生试剂对色谱柱会有损伤；Dan—1．3色谱条件svl—cl衍生法产物稳定但反应活性差，速度较慢。因色谱柱：华谱新创科技有限公司UnitaryC柱此发展一种低成本，灵敏、高效的检测方法显得尤(250mm~4．6mm，5m)；柱温：30℃；检测波长：为重要。本文选择PITC作为柱前衍生试剂，在衍生254nm；进样量：5ILL；流动相：A相：50mmol·L

8、反应后用多次溶剂萃取法去除过量的衍生试剂，结醋酸钠溶液(用乙酸调节pH到6．5)，B相：乙腈：甲合HPLC—uV分析方法，实现了18种氨基酸的分醇：水=60：20：20(V／V／V)，梯度洗脱程序：017离，可为复方氨基酸注射液的氨基酸高效全分析提min，95％～76％A；17～22min，76％～73％A；22~26供有力依据。min，73％～65％A；26～35min，65％~52％A；35～40min，52