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1、ChinaPharmacist2002,Vol.5No.6AccQ.Tag柱前衍生法分析蜂胶中的氨基酸含量冯光(兰州市第一人民医院730050)刘晓剑〔宁波商检局)刘大学(解放军兰州医学高等专科学校中心实验室)摘要用WatersAeeQ.Tag柱前衍生法分析了蜂胶中的氛基酸种类和含量，检出的氮基酸有LEC,HTS,THR,MET,PRO,对其中的HIS和MET进行了定量分析。二者的含童分别是11.58和9.60mg-g-'关健词氮基酸了分析柱前衍生法,WatersA-{2.Tago中图分类号:8927.2文献标识码;A文章编号:1008
2、-049X(2002)06-0354-02DeterminationofAminoAcidContentinBeeGluebyWatersAccQ.TagPrecolumnDerizapizationFengGuang(LanzhouCityfirstPeople'sHospital,730050,P.R.China)LiuXiaojian(NiangboQmmtoditiesInspetionBureau)LiuDaxue(CeutralLaboratoryofLanzhmPLAMedicalCollage)ABS1'RACtObje
3、ctive:VariousaminoacidcontentinbeegluewereanalysedbyWaterAccQ.Tagprecolumnderizapimtion,thedetectedaminoacidhadLEC.日I'S，丁HR,MET,andPRO,ofwhich,theHISandMETreceivedthequantitativeanalysis,theeon-tentsofbothwere11.58and9.60mg"g'，respectively.KEYWORDSAminnacid/analysis;Prec
4、olumnderizapization,WatersAccQ.Tag柱前衍生反向高效液相色谱法测定氨基酸的技1.1仪器和工作条件术已经取得长足进展[’一‘I，成为准确快速测定氨基Waters2010色谱工作站;Waters996二极管阵酸的强有力手段。War二公司设计生产的成套柱列检测器;Waters600泵;WatersAccQ.Tag氨基酸前衍生法试剂和分析柱是目前市场上较为成熟的产分析柱。品。本文运用WatersAccQ.Tag柱前衍生法和Wa-流动相A:WatersAccQ.TagFluentA100ml用ters高效液相色谱仪
5、分析蜂胶中的氨基酸种类和含色谱纯水稀释至IL:流动相B:60%乙氰:梯度洗脱量。程序表如表1。柱温:40`C;检测波长:250nma1实验材料和方法襄1FI'LC层析条件05时间(~)初始化一19323437386465100曰951.2试别下静置2--3min，析出乳白色胶状沉淀。离心沉淀标准氨基酸溶液:40pLWaters标准氨基酸样(4000r/min)3min，分出上清液。沉淀用上述方法品溶液，用色谱纯水定容至1.00ml，得每种氨基酸重处理4次。合并上清夜，在60℃水浴上减压蒸除浓度为100pmol/L的溶液。溶剂。用0.1m
6、ol-L’HCL溶解后定容至10.00衍生试剂:按AccQ.Tag法使用指南配制并保mlo存。1.4衍生及分析1.3样品处理1.4.1试样衍生分别取10闪标准氨基酸溶液和蜂胶中氨基酸的提取和定容:准确称取0.1783样品溶液，置于两支650mm样品管中，分别加70风g蜂胶置10ml离心管中，加无水乙醇2ml，在70℃AFBB(AccQ.FlourBorateBuffer)和20Al衍生试剂水浴上加热振摇3min使其溶解。取出试管，在室温AFR(AccQ.FluorReagent)，立即振摇数秒钟，在室中国药师2002年第5卷第6期温下静
7、置Imin后转人洁净样品瓶中，旋紧瓶盖(带1.4.2分析测试标准品和样品各平行测试5次，有硅橡胶垫)后置55℃水溶中10min，取出待测。每次进样5川，其中HIS和MEI，的定量结果如表2,表2蜂胶提取液中的氮基酸RUvR,平均值异系数AMQR.9.4879.5339.3659.596981卫95590.11173日15R,13.70313.59913.79813.51413剐13.6,940.0093u.124915101054987,9794589901121018910.132832.79832.68卫59432.715犯6593
8、2.689魄面积6736562188615976254461132629650_..04020302结果和讨论样品中检出5种氨基酸。在5一50umol-L’的氨基酸标准品和蜂胶样品的色谱图如图1，因为浓度范
