柱前衍生反相高效液相色谱法测定毛脉酸模根中氨基酸的含量

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1、柱前衍生反相高效液相色谱法测定毛脉酸模根中氨基酸的含量作者：岳云飞王振月王谦博【摘要】目的采用柱前衍生法测定毛脉酸模根中氨基酸的含量。方法利用柱前衍生反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定毛脉酸模根中16种氨基酸。采用DikmaC18色谱柱；流动相：A为0.05mol/L乙酸钠溶液中含1%N,N二甲基甲酰胺，B为乙腈水（1∶1），梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长360nm；柱温40℃。结果氨基酸的摩尔浓度与峰面积成良好的线性关系，r均在0.999以上；16种氨基酸的回收率为94.7%～112.9%。结论该方法准确、重现性好，可用于毛脉酸模根中氨基酸的含量测定。【关键词

2、】毛脉酸模氨基酸高效液相色谱法　　Abstract:ObjectiveTodeterminetheaminoacidsinrootofRumexgmelininderivatization.MethodsSixteenkindsofaminoacidsinedinrootofRumexgmelinibypre-columnofRPHPLC.HPLCanalysisedonDikmaC18columnixtureof0.05mol/Lsodiumacetatetocontain1%N,N-dimethylformamide(A)andacetonitrile-obilephasein

3、gradientmode.Theflol/min.Thedetectionandthecolumntemperatureolarconcentrationsofaminoacidsandpeakareasachievedanicelinearrelationship(rinoacidsethodisaccurateandrepeatableforthedeterminationofaminoacidsinRumexgmelini.　　Keyexgmelini;Aminoacids;HPLC　　毛脉酸模RumexgmeliniTurcz.为蓼科（Polyonaceae）酸模属多年生宿根

4、草本植物，广泛分布于黑龙江省大小兴安岭及张广才岭等地区，是黑龙江省、吉林长白山地区的重要药用资源植物。以根入药，味甘，性寒，有清热解毒、凉血止血、通便利尿之功，民间以治疗癣病或止血著称［1,2］。化学成分研究表明，毛脉酸模根中含有白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚及酸模素等多种化合物［3～5］，具有抗真菌、抗肿瘤、镇咳祛痰、平喘降压、抗病毒和抗氧化等作用［6～8］。因此，毛脉酸模有重要的开发价值。　　氨基酸是植物中的重要有效成分。研究表明，氨基酸有抗心血管、衍生物有抗肿瘤等作用［9］。近年来开始对人参、田七等植物药中的氨基酸进行了研究［10］，但对毛脉酸模中的氨基酸的分

5、析还未见报道过。本实验以2年生和3年生毛脉酸模为研究对象，采用高效液相色谱法对毛脉酸模根中的氨基酸进行测定，以期为毛脉酸模的开发利用提供理论依据。　　1仪器与材料　　Agilent-1100高效液相色谱仪，色谱柱为DikmaC18（200mm×4.6mm，5μm），Mettler电子天平AE240（瑞士），DIKMA微孔滤膜（0.45μm），ZK82B型真空干燥箱（上海市实验仪器总厂）。　　门冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、丝氨酸（Ser）、精氨酸（Arg）、甘氨酸（Gly）、苏氨酸（Thr）、脯氨酸（Pro）、丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、胱氨酸（Cy

6、s）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、赖氨酸（Lys）、酪氨酸（Tyr）、色氨酸（Try）购于Agilent公司；甲醇、乙腈为美国Dikma公司产品，色谱纯；水为自制重蒸水；其余均为分析纯。样品于20041001采自黑龙江中医药大学药用植物园（所有样品均由黑龙江中医药大学药学院中药资源与开发教研室王振月教授鉴定）。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为DikmaC18柱；流动相：A：0.05mol/L乙酸钠溶液中含1%N,N二甲基甲酰胺，B：乙腈水（1∶1），流动相梯度洗脱程序见表1；柱温40℃；流速1.0ml/min；检测波长360nm；进样量：对照品溶液进样20

7、μl；供试品溶液进样50μl。　　表1流动相梯度洗脱程序（略）　　2.2供试品溶液的制备将采集后的样品置40℃干燥后，粉碎成粉末（过80目筛），精密称取粉末0.2g，置索氏提取器中，以50%乙醇为溶剂回流4h，提取液回收至干，残渣用水溶解，过滤，滤渣和滤器用水洗涤，将滤液和洗液合并，用水定容至10ml，作为供试品溶液。　　2.3供试品的衍生取供试品1.0ml，加入0.5mol/L碳酸钠缓冲液（以0.5mol/L碳酸钠调0.5mol/L碳酸氢钠置pH为9.0