柱前衍生-反相高效液相色谱法测定人血白蛋白中辛酸钠含量.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第3期2010年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry425～428DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．00425柱前衍生-反相高效液相色谱法测定人血白蛋白中辛酸钠含量蒋翠岚王立娜韩继红蒋晔(河北医科大学药学院分析化学教研室，石家庄050017)(河北化工医药职业技术学院制药系，石家庄050026)摘要建立了柱前衍生一反相高效液相色谱法测定人血白蛋白中辛酸钠含量的方法。用正己烷萃取人血白蛋白中的辛酸钠，

2、与(o一溴苯乙酮和l8-冠-6醚在50℃反应30min，然后用甲醇．水(75：25，V／V)于Nova．ParkC。柱(150mm×3．9mm，4m)上分离，在262nm检测衍生物，流速为1．0mL／min，庚酸为内标。辛酸和庚酸的萃取率可分别达到98．2％和97．9％，RSD小于0．9％。方法的线性范围为9．00×10一一I．44×10-2mol／L(r=0．9995)，平均加样回收率为99．7％，RSD≤0．9％。本方法准确、重现性好，可用于人血白蛋白中辛酸钠含量的测定。关键词柱前衍生；反相高效液相色

3、谱法；人血白蛋白；辛酸钠1引言人血白蛋白制品在生产过程中，需在60进行病毒灭活处理10h。为了防止蛋白质发生高温变性，需加入适量辛酸钠作为保护剂。辛酸钠浓度过高可能导致白蛋白制品发生不良反应，如抑制血小板凝聚、引起低血糖症、抑制肝脏对长链脂肪酸的消除等】；辛酸钠浓度过低不能起到稳定制品的效果，故应选择合适的方法准确测定其含量，以保证白蛋白制品的安全性。传统方法是采用气相色谱法J，但此法进样量小、误差大。另有离子排斥色谱法_6和酸碱滴定法J，但后者混合溶解液影响终点判定J。反相高效液相色谱法作为一种高效、快

4、捷的通用分析方法，未见其在辛酸钠分析方面应用，原因可能是辛酸钠本身无紫外吸收，无法直接用通用紫外检测器进行检测。本研究建立了以∞一溴苯乙酮为衍生试剂，将辛酸钠衍生后用反相高效液相色谱法测定其含量的分析方法，测定可在10min内完成，分析速度快、结果准确、重现性好，可用于人血白蛋白中辛酸钠含量测定。2实验部分2．1仪器与试剂液相色谱仪系统包括：Spectra—Physics8810泵、Spectra—Physics8450检测器(美国)，HW色谱工作站(南京千谱软件有限公司)；LDZ24-0．8离心机(北京

5、医用离心机厂)；XW一80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；XW一8OA恒温干燥箱；QGC一12T氮吹仪(上海泉岛公司)。甲醇(色谱纯，美国FisherScientific公司)；乙腈(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)；辛酸(北京师化精细化工有限公司)；庚酸(天津市光夏精细化工研究所，20090313)；一溴苯乙酮(T20090122，国药集团化学试剂公司)；18一冠一6醚(A11249)；其它试剂均为分析纯；水为重蒸去离子水。人血白蛋白(山东泰邦生物制品有限公司，批号20070319s02，含量10

6、％；上海新兴医药股份有限公司，批号20090301，含量20％；大安生物制品公司，批号20090113，含量20％)。2．2实验方法2．2．1对照品溶液的制备准确称取41．6mg辛酸对照品于10mL容量瓶中，加水超声溶解，摇匀，定容，即得对照品贮备溶液。临用时逐级稀释，配制成系列浓度对照品溶液。2．2．2内标溶液的配制准确称取9．40mg庚酸，加水溶解并定容至10mL，得内标贮备液，浓度为2009-07-28收稿；2009—11-06接受}E—mail：jiangye@hebmu．edu．cn426分析化

7、学第38卷7．20×10～mol／L。准确量取贮备液5mL，稀释至10mL，得内标溶液。2．2．3衍生试剂溶液的配制准确称取25．3mg0．2一溴苯乙酮于5mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，得0．0250mol／L衍生试剂溶液，密封保存。2．2．4供试品溶液准确量取1mL人血白蛋白溶液于5"mL容量瓶中，加水溶解并定容，得供试品溶液。2．2．5样品处理及衍生化反应准确量取100IxL样品溶液，加100txL内标溶液，加0．5mL1．50mol／LHCIO，涡旋混合2rain，加1mL正己烷，涡旋混合2rai

8、n，3000r／min离心20min。准确量取上层正己烷溶液0．5mL，加20L0．050mol／LKOH．甲醇溶液，混合，氮气吹干，加衍生试剂溶液100、1．30g／L18．冠_《5醚溶液50L，涡旋混合、密封，于恒温干燥箱中50℃反应0．5h。将反应液用氮气吹干，再以0．5mL流动相复溶。2．2．6色谱条件Nova．ParkCls色谱柱(150lilm×3．9mm，4m)，流动相为甲醇一水(75：25，v／v)，检测波长为