柱前衍生反相高效液相色谱法测定毛脉酸模根中氨基酸的含量论文

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1、柱前衍生反相高效液相色谱法测定毛脉酸模根中氨基酸的含量论文岳云飞王振月王谦博【摘要】目的采用柱前衍生法测定毛脉酸模根中氨基酸的含量。方法利用柱前衍生反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定毛脉酸模根中16种氨基酸。采用DikmaC18色谱柱；流动相：A为0.05mol/L乙酸钠溶液中含1%N,N二甲基甲酰胺，B为乙腈水（1∶1），梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长360nm；柱温40℃。结果氨基酸的摩尔浓度与峰面积成良好的线性关系，r均在0.999以上；16种氨基酸的回收率为94.7%～112.9%。结论该方法准确、重现性好，可用于毛脉酸

2、模根中氨基酸的含量测定。【关键词】毛脉酸模氨基酸高效液相色谱法Abstract:ObjectiveTodeterminetheaminoacidsinrootofRumexgmelininderivatization.MethodsSixteenkindsofaminoacidsinedinrootofRumexgmelinibypre-columnofRPHPLC.HPLCanalysisedonDikmaC18columnixtureof0.05mol/Lsodiumacetatetocontain1%N,N-dimethylformamide

3、(A)andacetonitrile-obilephaseingradientmode.Theflol/min.Thedetectionandthecolumntemperatureolarconcentrationsofaminoacidsandpeakareasachievedanicelinearrelationship(rinoacidsethodisaccurateandrepeatableforthedeterminationofaminoacidsinRumexgmelini.Keyexgmelini;Aminoacids;HPLC毛脉

4、酸模RumexgmeliniTurcz.为蓼科（Polyonaceae）酸模属多年生宿根草本植物，广泛分布于黑龙江省大小兴安岭及张广才岭等地区，是黑龙江省、吉林长白山地区的重要药用资源植物。以根入药，味甘.freelaC18（200mm×4.6mm，5μm），Mettler电子天平AE240（瑞士），DIKMA微孔滤膜（0.45μm），ZK82B型真空干燥箱（上海市实验仪器总厂）。门冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、丝氨酸（Ser）、精氨酸（Arg）、甘氨酸（Gly）、苏氨酸（Thr）、脯氨酸（Pro）、丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸

5、（Met）、胱氨酸（Cys）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、赖氨酸（Lys）、酪氨酸（Tyr）、色氨酸（Try）购于Agilent公司；甲醇、乙腈为美国Dikma公司产品，色谱纯；水为自制重蒸水；其余均为分析纯。样品于20041001采自黑龙江中医药大学药用植物园（所有样品均由黑龙江中医药大学药学院中药资源与开发教研室王振月教授鉴定）。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为DikmaC18柱；流动相：A：0.05mol/L乙酸钠溶液中含1%N,N二甲基甲酰胺，B：乙腈水（1∶1），流动相梯度洗脱程序见表1；柱温40℃；流速1.0ml/mi

6、n；检测波长360nm；进样量：对照品溶液进样20μl；供试品溶液进样50μl。表1流动相梯度洗脱程序（略）2.2供试品溶液的制备将采集后的样品置40℃干燥后，粉碎成粉末（过80目筛），精密称取粉末0.2g，置索氏提取器中，以50%乙醇为溶剂回流4h，提取液回收至干，残渣用水溶解，过滤，滤渣和滤器用水洗涤，将滤液和洗液合并，用水定容至10ml，作为供试品溶液。2.3供试品的衍生取供试品1.0ml，加入0.5mol/L碳酸钠缓冲液（以0.5mol/L碳酸钠调0.5mol/L碳酸氢钠置pH为9.0）1.0ml和1%的2,4－二硝基氟苯的乙腈溶液1.0ml

7、，摇匀，60℃水浴暗处放置60min，取出冷却后，加入磷酸盐缓冲液（pH7.0）10ml，摇匀，过0.45μm的滤膜。2.4对照品溶液的制备取Agilent公司提供的对照品溶液，分别制备成浓度为25，100，250，500，1000pmol/μl的对照品溶液，按2.3项下衍生后进样20μl，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标作曲线（见表2）。样品和标准品的色谱图见图1。表216种氨基酸的标准曲线（略）图1毛脉酸模样品（a）和氨基酸混合标准溶液（b）的HPLC图（略）2.5精密度实验用氨基酸混合标准品溶液做6次平行实验，结果16种氨基酸的RSD均小于5%。

8、表明精密度良好。2.6稳定性实验取毛脉酸模根的粉末0.2g1份。按2.2项，2.3项下制备供试品溶液，分别在