邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定茶叶中17种游离氨基酸

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1、万方数据茶叶科学2011，31(3)：211-21712竺!!竺!丝!至堡苎!!呈丝呈!，——一邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定茶叶中17种游离氨基酸杨卫，鲜殊，李大祥+，宛晓春’安徽农业大学农业部茶及药用植物安全生产重点开放实验室，安徽合肥230036摘要：采用邻苯二甲醛作为柱前衍生化试剂，结合反相高效液相色谱，优化了色谱条件，实现对茶汤中17种一级氨基酸的精确定性和定量分析。17种氨基酸的保留时间和峰面积的RSD分别在O．02％～0．70％与0．11％～1．15％之间，经方法学考察，该方法具有良好的稳定性和重现性。关键词：HPLC；柱前衍生化：邻苯二

2、甲醛(OPA)：游离氨基酸：茶叶中图分类号：TS272；0657．7+2文献标识码：A文章编号：1000．369X(2011)03．211．07RP．HPLCDeterminationofSeventeenFreeAminoAcidsinTeawith0一phthalaldehydePrecolumnDerivationYANGWei，XIANShu，LIDa．xiang+，WANXiao—chun+KeyLaboratoryofTea＆MedicinalPlantandProductSafetyofMinistryofAgriculture，AnhuiAgri

3、culturalUniversity,Hefei230036，ChinaAbstract：Inthispaper，areversed-phasehighperformanceliquidchromatographycombinedwithprecolumnderivatizationwithO-phthalaldehydeandfluorescencedetectionwassetupforthequalitativelyandquantitativelyanalysisofseventeenkindsoffreeaminoacidsintea．TheRSDof

4、theretentiontimeandpeakareaofthe17kindsoffreeaminoacidswere0．02％-0．70％and0．11％-1．15％，respectively．Withvalidation，thismethodwasprovedtobeaccurate，stableandreproduciblefortheanalysisoffreeaminoacidsintea．Keywords：HPLC，pre-columnderivation，O—phthaldialdehyde(OPA)，freeaminoacid，tea茶叶中的游离

5、氨基酸与茶叶品质密切相关IlJ，其组成、含量以及在加工过程中的降解产物和转化产物均直接影响茶叶的品质，其中占游离氨基酸总量50％～80％的茶氨酸与茶叶品质的相关系数可达0．787～0．876，为强正相关【2J。由于茶叶中游离氨基酸对茶叶品质有着重要作用，因此多年来茶叶中游离氨基酸的定性和定量方法是茶叶品质研究中的重点内容。游离氨基酸检测方法主要有电化学分析法、纸层析和薄层色谱法、气相色谱法、离子交换色谱法(IEC)、高效液相色谱法和毛细管电泳法pJ，而当前检测方法则主要以离子交换色谱法中的柱后衍生高效阳离子交换色谱法(HPCEC)为主。HPCEC法是一种经典的氨

6、基酸分析检测方法。该法是利用氨基酸在酸性条件下形成阳离子，而后在阳离子交换柱中进行分离，分离后的氨基酸用茚三酮等衍生化试剂衍生，经紫外可见分光光度检测器进行检收稿日期：2010．12．13修订日期：2011．02．28基金项目：现代农业(茶叶)产业技术体系建设专项资金(农科教发【2008】10号)、国家标准化工作项目资助内容作者简介：杨卫(1984一)，男，安徽淮南人，硕士研究生，主要从事茶叶生物化学与综合利用的研究。t通讯作者万方数据212茶叶科学31卷测。如20世纪60年代初面世的氨基酸自动分析仪利用的就是该原理[4】。但该方法在应用中存在分析柱易被样品组分

7、污染，分析时间长且灵敏度较低的问题[5】。随着高效液相色谱法(HPLC)的高速发展，特别是反相色谱填料的快速发展，使反相高效液相色谱法(RP—HPLC)逐渐成为游离氨基酸检测的主要方法。该法与柱前衍生技术相结合，大大提高了氨基酸分析的灵敏度，弥补了HPCEC法中柱后衍生的不足，使RP．HPLC方法在氨基酸检测分析上的应用成为游离氨基酸检测方法发展的主流【4J。常见的柱前氨基酸衍生化试剂有邻苯二甲醛(OPA)、异硫氰酸苯酯(PITC)、氯甲酸芴甲酯(FMOC—CI)及丹酰氯(Dansyl—CI)。其中，Dansyl—CI衍生法存在着衍生后易生成干扰性副产物的问题。

8、FMOC．CI法中，为终