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《反相高效液相色谱 异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱法同时测定种氨基酸_杨菁》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、反相高效液相色谱异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱法同时测定18种氨基酸_杨菁导读：就爱阅读网友为您分享以下“异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱法同时测定18种氨基酸_杨菁”的资讯，希望对您有所帮助，感谢您对92to.com的支持!第20卷第4期2002年7月色谱CHINESEJOURNALOFCHROMATOGRAPHYVol.20No.4July20029异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱法同时测定18种氨基酸杨 菁, 孙黎光, 白秀珍, 周海涛1121(1.中国医科大学生化教研室,辽宁沈阳1100
2、01;2.锦州医学院,辽宁锦州121001)摘要:建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定18种氨基酸的方法。以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,用C18色谱柱在柱温38℃9下采用二元梯度洗脱,于254nm波长处检测。氨基酸质量浓度在3.5mg/L～55.6mg/L时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸的质量浓度的线性相关系数,除胱氨酸(0.962)外均大于0.99;18种氨基酸的加标回收率在96.0%～102.4%。信噪比为2时,亮氨酸最低检测限为0.5mg/L。应用该方法对小牛血去蛋白注射液中的游离氨
3、基酸含量进行了测定,取得了满意的结果。关键词:高效液相色谱法;柱前衍生化;异硫氰酸苯酯;正亮氨酸;氨基酸中图分类号:O658 文献标识码:A 文章编号:1000-8713(2002)04-0369-03SimultaneousDeterminationof18AminoAcidsbyReversed-PhaseHighPerformanceLiquidChromatographywithPrecolumnPhenylisothiocyanateDerivatizationYANGJing1,SUNLi-gu
4、ang1,BAIXiu-zhen2,ZHOUHai-tao1(1.DepartmentofBiochemistry,ChinaMedicalUniversity,Shenyang110001,China;2.JinzhouMedicalCollege,Jinzhou121001,China)9Abstract:Areversed-phasehighperformanceliquidchromatographicmethodforsimultaneousdeterminationof18aminoacidsisdes
5、cribed.Thesamplewasmixedwithnorleucineastheinternalstandard,thenderivatizedwithphenylisothiocyanate(PITC)andanalyzedonaKromasilC18columnat38℃,usinggradientelutionwithdetectionat254nm.Thecorrelationcoefficientsbetweentheratiosofpeakareaofaminoacidtothatoftheint
6、ernalstandardandtheaminoacidconcentrationswereabove0.99,exceptforcysteine(Cys)(0.962).Therecoveriesofaminoacidsaddedwere96.0%-102.4%.Detectionlimitofleucinewas0.5mg/L.Themethodwasappliedtoanalyzefreeaminoacidsindeproteinizedcalfbloodinjectionandgoodresultswere
7、obtained.Keywords:highperformanceliquidchromatography;precolumnderivatization;phenylisothiocyanate;norleucine;aminoacid9 测定氨基酸的方法很多[1,2],仅用于反相高效液相色谱(RP-HPLC)检测氨基酸的柱前衍生试剂就有近10种。在Koop等和Bidling-meyer等证明异硫氰酸苯酯(PITC)和氨基酸的反应产物苯基硫酸盐(PTC)-氨基酸的稳定性后,PITC才直接用于氨基酸分析。这种方法
8、的优点是PITC与氨基酸和亚氨基酸均能反应。该法是目前氨基酸分析中具有吸引力的分析方法之一。目前常用的异硫氰酸苯酯柱前衍生测定氨基酸方法[5～8]是在室温下进行衍生反应,然后进行两次快速蒸发干燥(以除去干扰因素),将残留物溶解过滤后再进行色谱分析。本 收稿日期:2001-12-15作者简介:杨 菁,男,1968年生,博士研究生,从事生化药物研究,E-mai
