高血压患者血浆中游离氨基酸的柱前衍生hplc法测定

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1、第28卷第1期分析测试学报Vol128No112009年1月FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis)72~75高血压患者血浆中游离氨基酸的柱前衍生HPLC法测定安芳,张洪飞,林丽娜,郭兴杰(沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016)摘要:以204-二硝基氯苯为衍生化试剂,建立了反相高效液相色谱法测定人血浆中22种游离氨基酸的方法。衍生化产物用KromasilC18柱分离,梯度洗脱,紫外检测波长为360nm。在所研究的浓度范围内,22种氨基酸的线性关系良好(r>0199),日内精密度(RSD)为11

2、7%~411%,日间精密度(RSD)为218%~619%,方法回收率为90%~106%。用建立的方法对高血压病人和正常人血浆中的游离氨基酸进行测定,并将测定结果进行主成分分析及判别分析,结果表明高血压病人与正常人血浆中的氨基酸存在显著差异,分类判别率为9414%。关键词:高效液相色谱法;血浆;氨基酸;高血压;204-二硝基氯苯中图分类号:O657172;Q517文献标识码:A文章编号:1004-4957(2009)01-0072-05DeterminationofFreePlasmaAminoAcidsinHypertensivePatientbyP

3、re-columnDerivatizationHPLCANFang,ZHANGHong-fe,iLINL-ina,GUOXing-jie(SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China)Abstrac:tAreversedphasehighperformanceliquidchromatographic(RP-HPLC)methodforsimulta-neousdeterminationof22freeplasmaaminoacidswasestablis

4、hedbyusing204-dinitrochlorobenzeneaspre-columnderivatizationagen.tTheaminoacidderivativeswereseparatedonaKromasilC18co-lumnwithgradientelutionmodeanddetectedatwavelengthof360nm.Thecalibrationcurvesshowedlinearityoverthestudiedconcentrationrange.Theintra-dayandinter-dayprecision

5、swere117%-411%and218%-619%,respectively.Thespikedrecoverieswerebetween90%and106%.Themethodwasappliedinthedeterminationoftheconcentrationofthefreeplasmaaminoacidsinhyper-tensivepatientsandhealthysubjects.Theexperimentaldatawerefurtheranalyzedbytheprincipalcomponentandclassificat

6、ionmethod,whichindicatedthattherewasacleardifferentiationbetweenhealthypeopleandhypertensionpatientswiththeclassificationvalueof9414%.Keywords:HPLC;plasma;aminoacids;hypertension;204-dinitrochlorobenzene[1-2][2]研究发现,体内氨基酸水平与高血压密切相关。刘春兰等用氨基酸分析仪对高血压患者与正常人血浆中的游离氨基酸进行检测,发现高血压患者血浆中的

7、游离氨基酸存在失衡。研究高血压病人与正常人体内氨基酸代谢物组的差异,有助于了解高血压的发病原因、预防和治疗高血压。[3-5][6][7]生物样品中氨基酸的测定多采用高效液相色谱法、气相色谱法和毛细管电泳法等。柱前衍生HPLC法测定氨基酸的技术具有选择性高、分析速度快和灵敏度高等优点,在药物和临床样品氨基酸分析中得到了广泛应用。本文采用204-二硝基氯苯(CDNB)为柱前衍生化试剂,用HPLC法测定高血压病人与正常人血浆中的22种游离氨基酸。在此基础上结合主成分分析与判别分析对高血压病人与正常人血浆中的氨基酸水平进行了比较研究。1实验部分111仪器与试

8、剂高效液相色谱仪(日本分光公司):PU-2080二元梯度泵;UV-2070Plus紫外检测器;Sepu300