柱前衍生-rp—hplc方法测定水产品中生物胺

《柱前衍生-rp—hplc方法测定水产品中生物胺》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、柱前衍生-RP—HPLC方法测定水产品中生物胺第37卷第3期2007年5月中国海洋大学PERIODICALOF0CEANUNIVERSITYOFCHINA37(3):427--431Mav.2007柱前衍生一RP—HPLC方法测定水产品中生物胺李志军L2,薛长湖,封锦芳.,周蕊4,周雪飞4,吴永宁4,赵云峰4(1.中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛266003;2.烟台大学食品科学与工程研究所,山东烟台264005;3.首都医科大学公共卫生与家庭医学学院,北京100050;4.中国疾病预防控制中心营养与食品安全所,北京100050)摘要:建立

2、同时测定水产品中多种生物胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱方法.用5%TCA提取样品中生物胺,正己烷脱脂,正丁醇/氯仿(1/1,v/v)萃取,以1,7二胺庚烷为内标,丹磺酰氯为衍生剂衍生后,采用CAPCELLPAKC18MG(4.6mmI.D.×150mm,5肿)色谱柱,以甲醇/水为流动相,进行梯度洗脱,流速1.5mL/min.荧光检测器的激发波长(Ex)350胁,发射波长(Era)520nm.结果显示:色胺,苯乙胺,腐胺,尸胺,组胺,酪胺,精胺和亚精胺等8种生物胺在30min内完全分离.在给定的浓度范围内,待测生物胺峰面积与内标峰面积之比同其相

3、应浓度呈良好的线性相关(r>0.99).仪器重复性良好(RSD<1.34%),方法重复性也在可接收范围内(RSD<10%).除色胺(57.7%)外,其它7种生物胺的样品平均回收率均在94,2%～110.3%之间.结果表明生物胺的HPLC检测方法,分离度好,灵敏度高,可快捷,准确地对水产品中生物胺进行定性和定量检测.关键词:高效液相色谱;生物胺;柱前衍生;水产品中图法分类号:TS201.2;TS254.7文献标识码:A文章编号:1672—5174(2007)03.427—05生物胺是存在于多种食品中的一类碱性有机化合物,广泛地存在于

4、水产品,肉制品,乳制品,葡萄酒,啤酒,蔬菜,水果,坚果和巧克力等食品中.摄入含有一定量生物胺的食物后,有些消费者可能会产生诸如头痛,恶心,血压升高,心悸等一系列不良症状,严重的还可能危及生命[1-2].生物胺中的组胺是引起水产品食物中毒的主要原因之一,而酪胺,尸胺和腐胺等生物胺的存在可增强组胺的毒性[2].尸胺,腐胺和组胺等生物胺还具有作为水产品鲜度和卫生状况指标的可能性[3-41.因此,许多国家和地区制订了水产品中组胺的限量标准.澳大利亚和欧盟规定水产品及其制品中组胺限量标准不得高于100mg/kg.美国FDA规定进口水产品中组胺含量不得高于50

5、mg/kg.J而我国水产品卫生标准中则规定鲐鱼类中组胺的限量标准为1000mg/kg,其它海水鱼类为300mg/kg,这与欧美的限定标准相差3～20倍.目前,食品中生物胺的测定方法主要有HPLC法[培],毛细管电泳法],离子色谱法[10].TLC法[11])和生物电化学法[].其中,以高效液相色谱一荧光检测法最为常用.美国1990年制定的组胺标准中采用的就是HPLC方法,而我国最新的水产品卫生标准中组胺测定标准采用的仍是化学比色法[13].我国在这方面的研究刚刚处于起步阶段,研究报道减少[14-15].本文采用柱前荧光衍生RP—HPLC技术对同时测

6、定水产品中8种生物胺的方法进行了研究并取得了满意的结果.1材料与方法1.1试剂与标准溶液参见文献[14].1.2样品活淡水鱼购于北京市农贸市场,即时宰杀取肉处理,一18℃冰箱保存;冷冻海水鱼,虾酱购于山东烟台水产超市,一18℃冰箱保存.1.3仪器与设备Agilent1100高效液相色谱仪,G1321A荧光检测器,BransoniB一2200E超声清洗器,VORTEX.2Genie涡流混合器,EasyPure(UV/UF)Bamstead超纯水器,奥立龙Mede1868酸度计,吹氮器,0.22m针头微孔滤膜过滤器.1.4色谱条件色谱柱为CAPCELL

7、PAKC18MG,150mm×4.6mmI.D.5m(日本ShiseidoCO.LTD),荧光检测器激发波长(Ex)350nm,发射波长(Em)520nm,进样量20L,柱温30℃,梯度洗脱,流动相A为甲醇,流动相B为超纯水,流速:1.5mL/min.洗脱程序见表1+基金项目:国家自然科学基金项目(30571572);科技部中国.希腊政府间科技合作项目资助收稿日期:2006.07.17;修订日期:2006.10.12作者简介:李志军(1966.),男,博士生,讲师.E.mail:li6220692@163.tom÷÷通讯作者:Email:xuech

8、@OUC.edu.crl,428中国海洋大学2007年1.5样品中生物胺的提取与净化1.5.1样品生物胺的提取除去皮和骨刺