肝豆状核变性线粒体超微结构的形态计量学分析-论文.pdf

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1、第33卷第1期电子显微学报Vo1．33，No．12014年2月JournalofChineseElectronMicroscopySociety2014-02文章编号：1000-6281(2014)01-0077-03肝豆状核变性线粒体超微结构的形态计量学分析吴敏霞，林旭云，胡祥炬(1．福建医科大学基础医学院病理学系电镜室，福建福州350004；2．福建江夏学院，福建福州350108；3．福建省疾病预防控制中心慢病科，福建福州350001)摘要：目的：比较肝豆状核变性(hepatolentieulardegeneration，Wilson’sd

2、isease，WD)与正常肝脏肝细胞线粒体的形态计量学差异。方法：应用透射电镜观察两组肝组织中肝细胞内线粒体并应用图像分析软件计算线粒体的平均周长、平均面积、数密度等。结果：肝豆状核变性肝细胞线粒体平均周长()、平均面积(A)均大于正常对照组线粒体，两者差异具有显著性(P<0．05)，数密度(Ⅳ)差异无统计学意义。结论：肝豆状核变性线粒体发生显著肥大。关键词：肝豆状核变性；线粒体；形态计量学中图分类号：R36；Q336文献标识码：Adoi：10．3969／j．1000-6281．2014．01．012肝豆状核变性，是一种常染色体隐性遗传的铜1．

3、2统计学方法代谢缺陷病。肝豆状核变性的细胞器损伤，特征性数据采用均数4-标准差(±s)表示，采用方差的改变是线粒体的形态改变和脂滴的存在⋯。线分析。粒体损伤在病情早期就可以出现，后期的病理改变2结果主要表现为不同程度的肝纤维化和肝硬化。正常肝脏含有少量早期脂肪变性的肝细胞(<30％)，肝功1．两组肝组织的超微结构变化：肝豆状核变性能无明显异常，在部分肝细胞中可见小脂滴的少量肝细胞胞质内线粒体形态多样，大小不一，见有长杆出现，如果继续发展至中重度脂肪肝晚期也可出现状、哑铃状、L形的线粒体，偶见巨线粒体，基质电子肝纤维化，易与肝豆状核变性的病理改变

4、混淆，本实密度增加，其内膜与外膜之间间隙和嵴内间隙增大，验通过形态计量学方法比较两组肝细胞线粒体偶见内外膜分离现象。肝细胞内可见特殊颗粒，高的差异。电子密度，颗粒中有大小不一的圆形透亮空泡，分布不规则。部分肝细胞内可见大小不等的脂滴，位于1材料与方法胞核的周边或者弥漫分布在胞浆内。肝细胞表面微1-1标本的收集及处理绒毛化明显，细胞间可见有胶原纤维束形成，毛细胆肝豆状核变性病肝组织和正常肝组织各3例，管扩张、增生、胆栓形成。汇管区可见胶原纤维和成取材后，3％戊二醛．1．5％多聚甲醛混合固定液前固纤维细胞增生。正常肝脏，其中少部分肝细胞发生定，1％

5、锇酸一1．5％亚铁氰化钾后固定，乙醇一丙酮早期脂肪变性，胞质内可见大小不等的少量脂滴。梯度脱水，环氧树脂618包埋剂浸透及包埋；超薄切2．两组肝组织肝细胞线粒体形态计量分析：肝片，醋酸铀、柠檬酸铅染色，在飞利浦EM208型透射豆状核变性组肝细胞线粒体平均周长、平均面积及电镜下观察肝豆状核变性组织和正常肝组织，并采数密度组内比较没有显著性差异(P>0．05)；正常集图像(每例标本所取组织制备3—5个电镜包埋组肝细胞线粒体平均周长、平均面积及数密度组内块，每一包埋块均只选看1张超薄切片)，每张超薄比较没有显著性差异(P>0．05)；肝豆状核变性肝切

6、片随机选出1O个肝细胞，描出其内所有线粒体，细胞组线粒体与正常组肝细胞线粒体组间比较平均用德国SIS公司自动电镜图像分析软件包进行图像周长值、平均面积值都有显著性差异(P<0．01)，数分析，计算出肝细胞线粒体平均面积、平均周长和数密度值差异无统计学意义(P>0．05)，见表1。密度。收稿日期：2013—12—04基金项目：福建医科大学苗圃科研基金资助项目(No．2010MP027)；福建省教育厅科研项目(JA13146)作者简介：吴敏霞(1977一)，女(汉族)，福建安溪人，助理研究员．E—mail：yuer408@163．com78电子显微

7、学报J．Chin．Electr．Microsc．Soc第33卷表1两组肝组织肝细胞线粒体形态计量学代表线粒体的分布密度；平均周长是平均每个线粒参数比较(i±，，l=30)体截面具有的周长，平均面积是平均每个线粒体截Table1Comparisonofthemitochondrialmorphometric面具有的面积，分析线粒体平均周长和平均面积是parametersintwogroupsoflivertissus(~±s。，l=30)反映线粒体有无增大的重要指标，可以说明线粒体平均积数密度受损伤的情况。肝豆状核变性肝细胞线粒体平均周组别平(_

8、均长m)(m)长和平均面积均显著高于正常肝肝细胞线粒体，说肝豆状核变性2．606±O．1240．480±0．0520．415±O．491明其线粒体体积