骨髓间充质干细胞对镉致大鼠肾脏损伤的修复作用研究

《骨髓间充质干细胞对镉致大鼠肾脏损伤的修复作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、骨髓间充质干细胞对镉致大鼠肾脏损伤的修复作用研究ResearchontheRepairEffectofBoneMarrowMesenchymalStemCellsonKidneyInjuryofRatsCausedbyCadmium作者姓名：秦永刚专业名称：卫生毒理学指导教师：郭丽教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年5月29日中文摘要骨髓间充质干细胞对镉致大鼠肾脏损伤的修复作用研究自20世纪初发现镉以来，镉在人们的日常生产生活中出现日趋频繁。电镀、采矿、冶炼、染料及化工废水的排放等污染水源及土壤，造成人们食用的农作物及鱼虾体内

2、镉含量超标。镉在人体内的生物半衰期长达10-25年，并且镉的清除率低，最终造成镉在人体内大量蓄积。肾脏可蓄积镉吸收量的1/3，是镉中毒的重要靶器官，肾脏的结构及功能损伤不容忽视。目前对镉中毒患者主要以对症支持治疗为主，但只能使病情缓解，无法修复肾脏损伤，临床上迫切需要一种科学有效的方法来治疗镉对机体造成的肾脏损伤。骨髓间充质干细胞（bonemesenchymalstemcell，BMSCs）具有来源方便、稳定、易于体外分离培养、增殖能力强、免疫原性弱、多向分化潜能、移植后向受损部位归巢并修复其损伤的特点，在组织损伤修复方面具有良好的

3、发展潜能和广阔的应用前景，近年来备受医学研究青睐。已有研究表明：BMSCs对于缺血再灌注引起的肾脏损伤和烧伤引起的肝脏损伤等有良好的修复效果，但关于BMSCs能否修复镉染毒所致的肾脏组织损伤国内外还未见详尽报道。因此本课题将BMSCs移植进镉染毒所致肾脏损伤的大鼠体内，观察其对镉染毒所致大鼠肾脏损伤的修复作用，并初步探讨其修复机制，希望为临床治疗镉染毒所致肾脏损伤提供新的思路和一定的理论依据。目的：探讨骨髓间充质干细胞静脉移植后对镉致肾损伤的修复作用，并初步探讨其作用机制。方法：取Wistar大鼠乳鼠骨髓细胞，采用贴壁培养法纯化、扩

4、增BMSCs。利用流式细胞仪检测BMSCs周期及表面标志物CD44、CD45和CD90。选用30只成年雄性Wistar大鼠，随机分为空白对照组、模型组（经球后静脉注入生理盐7水0.2mL）和细胞治疗组（经球后静脉注入BMSCs0.2mL，1×10个），每组10-1只。给予0.4mg﹒kg体重的CdCl2溶液染毒，每周5次，连续染毒5周，制备大鼠镉致肾脏损伤模型，空白对照组给予等量生理盐水。染毒结束后，将氯甲基I苯甲酰胺（CM-Dil）标记的BMSCs经球后静脉移植到细胞治疗组大鼠体内，空白对照组及模型组给予同等体积的生理盐水，移植后

5、每日观察大鼠一般状况及体质量变化。细胞移植2周后取大鼠血清检测肌酐（CR）、尿素氮（BUN）和β2-微球蛋白（β2-MG）含量；取肾脏组织测定肾脏组织内镉水平；计算脏器系数；HE染色进行病理组织学观察；TUNEL法检测肾脏组织细胞凋亡；免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、Beclin1及LC3B的表达；Westernblot法检测肾脏组织内Bax、Bcl-2的相对表达水平。肾脏组织冰冻切片后，采用激光共聚焦显微镜观察BMSCs在细胞治疗组大鼠肾脏组织内的定植情况。结果：BMSCs贴壁生长状态良好，流式细胞仪检测

6、显示BMSCs阳性表达CD44和CD90，基本不表达CD45，细胞大部分处于相对不活跃的静止期。细胞移植2周后，模型组大鼠明显精神萎靡且少动，细胞治疗组大鼠精神行为状态明显好于模型组，且细胞治疗组大鼠体质量显著高于模型组（P＜0.05）。生化法检测，细胞治疗组大鼠肾脏功能显著优于模型组（P＜0.05）。脏器系数结果表明，与空白对照组相比，模型组大鼠肾脏脏器系数显著降低（P＜0.05），与模型组相比，细胞治疗组大鼠肾脏脏器系数显著增高（P＜0.05）。原子吸收法检测，空白对照组大鼠肾脏内仅有微量镉蓄积，模型组大鼠与细胞治疗组大鼠肾脏组

7、织内蓄积大量镉，二者无明显差别。病理组织学观察显示，模型组大鼠肾脏肾小管及肾小球存在形态学损伤，而细胞治疗组大鼠肾脏病理损伤明显轻于模型组。TUNEL法检测，细胞治疗组大鼠肾脏细胞凋亡率显著低于模型组（P＜0.05）。免疫组织化学法检测，与空白对照组相比，模型组大鼠肾脏组织内Bax、Caspase-3、Beclin1及LC3B蛋白表达水平显著增加（P＜0.05），Bcl-2表达显著降低（P＜0.05），与模型组相比，细胞治疗组大鼠肾脏组织内Bax、Caspase-3、Beclin1及LC3B蛋白表达水平显著降低（P＜0.05），Bc

8、l-2表达显著增加（P＜0.05）。Westernblot法检测，与空白对照组相比，模型组大鼠肾脏组织内Bax蛋白相对表达水平显著升高（P＜0.05），Bcl-2相对表达水平显著降低（P＜0.05），而Bcl-2与Bax比值(Bcl-