转shh基因的骨髓间充质干细胞修复大鼠脊髓损伤的实验研究

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1、万方数据分类号：R826．64密级：单位代码：10114学号：DR2011033转Shh基因的骨髓间充质干细胞修复大鼠脊髓损伤的实验研究BoneMarrow—derivedMesenchyrealStemCellsExpressingtheShhTransgenePromotesFunctionalRecoveryafter研SpinalCordInjuryinRats指导教师：割强教援申请学位门类级别：医堂盟±专业名称：处科堂研究方向：脊髓损笾学院名称：箍二蝤废医堂院中国山西二。一四年三月十日万方数据学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本文独

2、立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本入的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。⋯～：唧谴吼叫中年f删目学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使

3、用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者虢嘲幸住隗撕铲年厂躬『日指导教师签名：d＼、心臁测争年r月弓f日(本声明的版权归山西鏖科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)万方数据山西医科大学博士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯11前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯．．23第一部分大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定⋯⋯⋯．⋯⋯⋯25前言．．．⋯．．．⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．．．．．．．．⋯⋯．．．．．25材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261．实验动物一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．262．主要仪器和试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．．263．实验方法⋯．．．．．．⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．⋯．．．．273．1大鼠骨髓间充质干细胞的原

5、代分离培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．273．2BMSCs的纯化及传代⋯．．．⋯．⋯⋯⋯．．．．⋯⋯．．．．⋯．．．．283．3BMSCs的形态学检查⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．283．4MTT法检测细胞增殖能力⋯．．．．．．．．⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．⋯．283．5流式细胞术测定BMSCs的细胞表面标记物表达⋯⋯⋯⋯⋯．．283．6BMSCs的成骨成脂诱导分化能力⋯．．⋯．⋯⋯⋯．．．．．．⋯．．．29结果．．．．．．．．．⋯⋯⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯⋯⋯．．．301．BMSCs的形态学鉴定．．⋯⋯．．⋯⋯．．．．．．⋯⋯⋯．．．．．．⋯．．．302．

6、BMSCs的细胞生长曲线⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯．．⋯⋯⋯．．313．BMSCs表面标记物的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯324．BMSCs成骨成脂诱导分化鉴定．．⋯．．．．．．．⋯⋯．．⋯⋯．．．⋯⋯33结论．．．⋯．．．⋯．．⋯⋯．．．．⋯⋯．．⋯⋯⋯．．．．．．．．．⋯⋯．．．．34讨论．．．．．．⋯⋯．．．．．．．⋯．．⋯．．．．．．．．．．．⋯⋯⋯．．．．．．．．．⋯．35第二部分构建转音猬因子基因的骨髓间充质干细胞和鉴定⋯⋯⋯．．．．．．37前言．⋯．．．．．⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯．．．．．．⋯．．．．37材料和方法．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯．．37万方数据山西医科大学博士学位论文1．主要仪器和试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯。．372．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．402．1构建大鼠音猬因子(Sonichedgehog，Shh)的载体⋯．．⋯⋯．402．2构建Shh慢病毒并利用其感染BMSCs⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．422．3Real-timePCR测定转染细胞Shh的mRNA表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯442．4Westernblot测定转染细胞Shh的蛋白含量⋯⋯．⋯⋯⋯．．46结果，．．．．⋯．．⋯．．．．．．．．⋯⋯．．．．⋯．．．⋯⋯．．．⋯⋯⋯．．．．．501．构建大鼠音