低氧预处理骨髓间充质干细胞对大鼠急性肾损伤修复能力的影响

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1、复旦大学硕士研究生毕业论文低氧预处理骨髓间充质干细胞对大鼠急性肾损伤修复能力的影响Theeffectofhypoxicpreconditioningofbonemarrowderivedmesenchymalstemcellsonratacutekidneyinjury院系中山医院专业内科学（肾脏病学）姓名刘红指导教师滕杰副主任医师指导小组俞小芳主治医师丁小强主任医师完成日期ϊ2012年4月20曰本研究受国家自然科学基金项目资助（项目编号：81000307)目录巾英文缩略词对照表ϊ1申热要ϊ2英讀要ϊ5前言ϊ8第一部分：大鼠骨髄间

2、充质干细胞分离培养及低氧预处理模型的建立材辟方法ϊ11縣ϊ14讨论ϊ19楊ϊ22参考文献ϊ23第二部分：低氧预处理对大鼠骨髗间充质干细胞体外迁移能力的影响及其机制研究材妈方法ϊ24结果ϊ32讨论ϊ37循ϊ39参考文献ϊ40第三部分：低氧预处理骨髄间充质干细胞颈动脉注射移植治疗大鼠急性缺血性肾损伤的实验研究材购_ϊ42结果ϊ45讨论ϊ50摘ϊ53参考文献ϊ54全文鮮ϊ56文献综述ϊ57祿和致谢ϊ682012年复旦大学硕士学位论文中英文缩略词对照表英文缩写英文全称中文全称AKIacutekidneyinjury急性肾损伤APammon

3、iumpersulfete过硫酸铵BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白BMSCsbonemarrowmesenchymalstemcells骨髓间充质干细胞BUNBloodureanitrogen血清尿素氮CoCfccobaltdichtoride二氯化钴CXCR4chemokinereceptor4趋化因子受体4DMEMDulbecco'smodifiedEeagle'smedium改进的培养基DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜FBSfetalbovineserum胎牛血清FCMflowcyt

4、ometer流式细胞仪GFPgreenfluorescentprotein绿色荧光蛋白HEHematoxylinEosin苏木素-伊红fflFhypoxia-induciblefactor低氧诱导因子HIF-lahypoxia-induciblefactor-1a低氧诱导因子-letHPhypoxicpreconditioning低氧预处理MRIMagneticResonanceImaging磁共振成像RNAiRNAinterferenceRNA干扰siRNAsmallinterferenceRNA小分子干扰RNAPCRPolym

5、erasechainreaction多聚酶链式反应PEPhycoerythrin藻红蛋白FITCFluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素I/Rischemiarepeffusion缺血/再灌注SPIONsuperaramagneticironoxidnanoparticle超顺磁氧化铁纳米颗粒PLLPoly-L-Lysine多聚赖氨酸PHDprolinehydroxylation脯氨酸羟化酶2012年复旦大学硕士学位论文中文摘要第一部分大鼠骨髄间充质干细胞分离培养及低氧预处理模型的建立目的：全骨髓细胞贴壁法

6、分离培养大鼠骨髓间充质干细胞（Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)，采用氯化钴（CoCfe)建立化学低氧预处理BMSCs实验模型。方法：釆用全骨髓细胞贴壁法分离培养BMSCs，倒置显微镜下观察细胞形态及生长过程，取第3-4代细胞用于实验。体外标准诱导下检测此类细胞成脂、成骨等多向分化能力，并以流式细胞仪检测其表面标志物CD29、CD90、CD45。分别采用四甲基偶氮唑盐（MTT)法和流式细胞仪，检测不同CoCfc浓度（0、50、100、150、200、300、400、6(%mol/L)和不同培

7、养时间（Oh、6h、12h、24h、48h、72h)培养条件下BMSCs的增殖和凋亡情况，确立CoCl2化学低氧预处理BMSCs实验模型。结果：1.原代细胞呈梭形或不规则形，贴壁集落生长，贴壁细胞经3次传代后，细胞大小及形态趋于一致，呈长梭形、放射状生长。2.在标准成脂诱导条件下，油红染色证实其可向脂肪细胞分化；在标准成骨诱导条件下，茜素红染色证实其可向成骨细胞分化；流式细胞仪检测细胞表面抗原，结果显示CD29和CD90高表达，CD45低表达，符合骨髓间充质干细胞免疫表型。3.细胞培养液中CoCfe终浓度不超过200nmol/L、

8、培养时间不超过24h对BMSCs的增殖和凋亡无明显影响。结论：1.全骨髓细胞贴壁培养法可获得较高纯度的大鼠BMSCs,满足体外实验要求。2.本研究最佳低氧预处理BMSCs实验模型为细胞培养液CoCk终浓度200nmol/L>培养时间24h。关键词：