egcg通过ku70及其乙酰化诱导人肺腺癌细胞株凋亡的初步研究

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1、中图分类号篷主埋：三UDC厶l翌博士学位论文学校代码丝壁主密级肆EGCG通过Ku70及其乙酰化诱导人肺腺癌细胞株凋亡的初步研究TheActionMechanismofEGCGInducedApoptosisofHumanLungAdenocarcinomaCellsbyRegulatingtheExpressionofKu70andItsAcetylationState作者姓名：李晶晶学科专业：临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：胡成平教授答辩委员会主席中南大学2013年4月原创性声明本人

2、声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：瑾墨童童日期：盈丝年上月卫日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部

3、或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。⋯名也新签衅眺丝一生日博士学位论文中文摘要第一章EGCG抗肺癌A549细胞活性的研究目的：研究EGCG对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用及凋亡诱导作用；方法：1．常规培养A549细胞，EGCG处理A549细胞；2．MTT法测细胞的生长抑制率，形态学观察细胞形态变化，双染法流式细胞仪测细胞凋亡；3．建立A549细胞裸鼠移植瘤模型，分别用生理盐水、EG

4、CG、顺铂处理；4．定期测量并记录肿瘤的体积，裸鼠的体重。结果：1．随着EGCG处理浓度的增加及处理时间的延长细胞的存活率下降，凋亡率增强，细胞体积变小、变圆，胞质浓缩，核固缩，有凋亡小体出现。2．生理盐水中，移植瘤随着时间的延长，肿瘤体积明显增大，而接受EGCG或顺铂处理的裸鼠，其移植瘤的生长受抑制，抑制率分别为37％署N50％，同时EGCG组裸鼠体重较顺铂组重，毒副作用小。结论：1．EGCG作用于人肺腺癌A549细胞株，有抑制增殖诱导凋亡的作用，呈浓度及时间依赖性。2．EGCG对人肺腺癌A549细胞移植瘤的

5、生长有抑制作用，且对裸鼠无明显的毒副作用。第二章EGCG通过线粒体凋亡途径诱导肺癌A549细胞凋亡目的：探讨EGCG是否通过调节Bcl．2家族成员诱导A549细胞凋亡。本课题受湖南省研究生科研创新项目资助项目编号：CX20118060ThisworkwassupportedbyinnovationprojectsofpostgraduateinHunanProvinee博士学位论文中文摘要方法：1．分别用Westernblot法、RT-PCR法及real．timePCR测Bax、Bcl．xl及Caspase．3

6、(17KDa)的蛋白及mRNA的表达；结果：1．体外实验中，随着EGCG处理浓度的增加及时间的延长，Bax的mRNA及蛋白的表达量增强，相反Bcl．xl的表达下降，而Caspase．3(17KDa)的蛋白表达则增强；2．体内实验中，较生理盐水组相比，EGCG组肿瘤组织中Bax的mRNA及蛋白的表达量增强，相反Bcl．xl的表达下降，而Caspase一3的蛋白表达则增强；均介于生理盐水组和顺铂组之间；结论：EGCG可以上调A549细胞Bax的表达，下调Bcl—xl的表达，同时上调Caspase．3(17KDa)的

7、表达，并呈时间和浓度依赖性。第三章EGCG通过Ku70调控肺癌细胞A549的凋亡目的：探讨EGCG是否通过下调Ku70的表达诱导A549细胞凋亡。方法：1．分别用Westemblot法、RT-PCR法及real．timePCR检测Ku70的蛋白及mRNA的表达；2．免疫共沉淀法检测Bax—Ku70之间的相互作用；3．为研究Ku70在EGCG促进A549细胞的凋亡作用中的影响，将pSliencer4．1-CMV-Ku70一shRNA转染入A549细胞，抑制Ku70的表达，后用EGCG处理细胞，再用Westembl

8、ot测蛋白的表达，双染法流式细胞仪测凋亡率。结果：1．体外实验中，随着EGCG处理浓度的增加及时间的延长，Ku70mRNA及蛋白的表达量下降，Bax．Ku70之间的相互作用减弱；2．在体内实验中，较生理盐水组相比，EGCG组肿瘤组织中Ku70的mRNA及蛋白的表达量低，Bax—Ku70之间的111博士学位论文中文摘要相互作用强；3．Ku70被抑制后，EGCG对A549细胞的促凋亡作用增