槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞a549凋亡的研究

《槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞a549凋亡的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、湖北中医药大学硕士学位论文槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的研究姓名：张畅申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：宁勇20120509摘要目的：以人肺腺癌细胞A549为研究对象，通过不同方法研究槐耳清膏对A549细胞的生长抑制和诱导凋亡的影响，并初步研究其诱导凋亡的作用机制，为进一步深入研究其诱导肺腺癌细胞凋亡的分子机制奠定基础，也为应用槐耳清膏治疗肺癌提供理论和基础实验依据。方法：应用MTT法检测该药对A549生长抑制作用；倒置相差显微镜、荧光倒置显微镜下观察A549的形态学变化；离心柱式DNA抽提试剂盒提取肿瘤细胞DNA后，应用琼脂糖凝

2、胶电泳分析槐耳清膏对A549的凋亡诱导作用；流式细胞仪检测凋亡细胞以及分析细胞周期；采用免疫印迹法检测p53，bel．2的蛋白水平变化．结果：MTT法检测槐耳清膏对人肺腺癌细胞A549的生长抑制作用的结果发现随着药物浓度的升高而增强，到3mg／ml时达到高峰；随着药物作用时间延长，细胞生长抑制率随之增加，不同浓度药物作用到36h均达到高峰，其中3mg／ml槐耳组细胞生长抑制率均值为39．3％，与顺铂阳性对照组36小时相比，差异无显著性(P>0．05)；经过槐耳清膏处理后的A549细胞在倒置相差显微镜下可以见到细胞变形，细胞膜完整但是周围有发泡现象，晚期

3、能看到细胞膜皱缩、凹陷，甚至出现凋亡小体；荧光染色可以看到浓染致密的荧光颗粒，新月形改变，固缩或者片段化的细胞核；DNA琼脂糖凝胶电泳可见梯形条带；流式细胞术检测可见药物处理后的A549细胞其DNA直方图上出现亚二倍体的凋亡峰，而且周期分析发现槐耳清膏能够阻止A549细胞由S期进入G2／M期；免疫印迹法检测显示，槐耳清膏处理后的A549细胞中p53蛋白的表达增强，而bcl．2蛋白的表达减弱。关键词：肿瘤细胞凋亡；槐耳；流式细胞术；免疫印迹；梯形条带n硕士研究生：张畅导师：宁勇ApoptosisofHumanLungAdenocarinomaCellLi

4、neA549InducedbyTrametesRobiniophilaSpecialty：ClinicalLaboratoryDiagnosticsAuthor：ZhangChangTutor：Prof．NingYongAbstractObjective：WechosehumanlungadenocarcinomaA549asresearchobject，studiedtheeffectofTrametesRobiniophila(TR)ongrowthinhibitionandapoptosisinductionofcelllineA549using

5、differentmethods，andpilot—studiedthemechanismofapoptosisinductionbyTR,whiehwillprobideabasisforfurtherinvestigatingthemolecularmechanismoflungcellapoptosisinducedbyTR,andwillprovidethetheoreticalandexperimentsevidencetotreatlungcancerbyTR．Methods：TheinhibitoryeffectofTrametesRob

6、iniophilaongrowthofA549celllinewasexaminedbymethylthiazolyltetrazolium@仃T)assay．CellmorphologyWasobservedunderreversedphasecontrastmicroscopeandreverSedfluorescencemicroscope．EffectofTRonapoptosisinductionofA549wasanalyzedbyagaroseelectrophoresis．Flowcytometryshowedcellcycleanda

7、poptoticcell．Thep53andbcl-2familyexpressioninA549cellsinducedbyTrametesRobiniophilabybyWesternblot．Results：ResultsabtainedbyMTTindicatedthatinhibitoryeffectoftheextractsonA549cellsincreasedwiththeincreaseofconcentrationandtime．TheeffectreachedapeakwhentheconcentrationiS3mg／m1．Th

8、einhibitoryratioofcellgrowthastheconcentrationo