扶正消癌合剂诱导人肺腺癌a549细胞凋亡的实验研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterApoptosisinducingEffectofFuzhengxiaoaimixtureonhumanlungadenocarcinomaA549cellsByJiyingDuSupervisor：Prof．XiaomingDengCombinedTraditionalChineseandWesternMedicineTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2013原创性声明IIIIIIFIIF

2、IIIPIIrIIIIIIY2315153本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：杜乡己廷日期：如f弓年歹月2午El学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学

3、可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：杜名己廷日期：如f弓年歹月2午日摘要扶正消癌合剂诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究硕士研究生：杜纪英导师：邓晓明教授郑州大学第一附属医院中西医结合科河南郑州450052摘要背景与目的：肺癌是全球范围内发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一。美国数据统计，在2009年美国大概有219440人患有肺癌，而将近159390人死

4、于该疾病，而全球每年约有130万人死于肺部肿瘤。因肺癌大多发病隐匿，大部分患者确诊时已属晚期，失去手术机会。当前，恶性肿瘤的治疗主要采用手术治疗、放化疗等方法。随着分子生物学及药理学的发展，生物治疗、靶向治疗及多学科的综合治疗已成为抗肿瘤研究的热点。而且大量数据证实，抗肿瘤化疗药物毒副作用大，且长期用易产生耐药性等劣势。近年来中医中药抗肿瘤越来越受到国内外医药界的关注。诱导肿瘤细胞的凋亡视为治疗肿瘤疾病的主要目标和手段。扶正消癌合剂是导师多年经验用方，临床研究表明它能改善晚期肺癌患者的临床症状，增强机体免疫功能，提高生存质量等。但是具体作用机制还不明确。本实验采用血清

5、药理学方法，研究扶正消癌合剂对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响并探讨可能存在的发生机制，为其临床应用提供可能的理论和实验依据。方法：雄性SD大鼠60只随机分为6组(每组lO只，组间体重无差别)，分别是扶正消癌合剂低剂量、中剂量和高剂量组，DDP组，中药联合DDP组，生理盐水组，中药组按照人与鼠体表面积换算法及血清药理学实验方法，分别给予扶正消癌合剂低、中、高剂量灌胃药液灌胃，DDP组给予腹腔注射O．5mg／ml的摘要DDP，中药联合DDP组予扶正消癌合剂中剂量灌胃药液灌胃及腹腔注射0．5mg／ml的DDP，生理盐水组予0．9％氯化钠溶液灌胃。均连续给药7天，每天2次，每

6、次2ml。末次灌胃后2h后水合氯醛腹腔注射麻醉，无菌条件下腹主动脉采血，分离血清，56℃灭活30min，经0．22I-tm过滤除菌，．20℃保存备用。制备大鼠含药血清，MTT法检测扶J下消癌合剂含药血清对人肺腺癌A549细胞增值的影响。AnnexinV-FITC／PI双染法流式细胞术观察含药血清对A549细胞凋亡的影响。Western．Blot检测含药血清对P53，Bcl．2及Survivin蛋白表达的影响。结果：1．倒置显微镜下观察，正常A549细胞呈贴壁生长，多为梭形或椭圆形，胞浆透亮饱满，细胞增殖速度快。扶正消癌合剂含药血清作用48h后，可见空白对照组细胞状态生

7、长良好。而中剂量组部分细胞的形态变为圆形，细胞间隙些许增大，高剂量组和DDP组，细胞体积变小，细胞间隙较宽，少部分细胞出现脱落。观察到联合组的细胞出现脱落，部分细胞肿胀、破碎，呈坏死状态。并且药物作用72h后细胞数量明显减少，细胞凋亡更加显著。2．不同浓度的中药含药血清作用于人肺腺癌A549细胞24h、48h、72h，对细胞有明显的抑制功能。随着含药血清药物浓度的增加、时间的延长，抑制作用则增强，呈现时间及剂量相关性，并且高浓度组抑制率仅次于DDP组，联合组抑制率最高，高达38．68％，与对照组比较差异有统计学意义(尸<0．05)。作用96h后，抑制