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《鬼臼毒衍生物诱导人肺腺癌a549细胞凋亡论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、鬼臼毒衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡论文【关键词】鬼臼毒素；肺肿瘤；腺癌；,细胞凋亡；抗原,CD95；基因,BclApoptosisinhumanlungadenocarcinomacelllineA549byderivativeofpodophyllotoxin【Abstract】AIM:TostudytheapoptosisofhumanlungadenocarcinomaA549cellsinducedby2,aderivativeofpodophyllotoxin,andtoobtaininsightsintoitsmolecularmec
2、hanismofaction.METHODS:MTTassay,electronmicroscopy,DNAagarosegelelectrophoresisandcellcycleananlysisineapoptosisinA549cells.ExpressionsofBcl2,caspase3andFasproteinseasuredetry.RESULTS:2onstratedtoexertantiproliferativeactivityinadoseandtimedependentmanner.IC50ofA549after24,48,72
3、hexposureto2g/L,.freelorphologicalchangesicroscope;agarosegelelectrophoresisshoentation;cellcycleanalysisindicatedanincreasedSphaseproportion,asatically.Fasproteinexpressionshos;adenocarcinoma;apoptosis;antigens,CD95;genes,Bcl2【摘要】目的：研究鬼臼素衍生物2对人肺腺癌细胞A549的凋亡诱导作用，并对其分子机制进行初步探讨.方法：
4、采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和细胞周期分析法检测A549细胞凋亡；采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl2,Fas及caspase3蛋白表达水平.结果：2对A549细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖的抑制作用，24,48,72hIC50分别为108.20,41.28,20.67mg/L，电镜观察呈现典型的凋亡形态改变；DNA电泳可见明显的梯状条带；细胞周期分析显示S期细胞数明显增多，出现S/G2期阻滞；2能显著降低Bcl2蛋白表达(P0.05)；Fas蛋白表达水平未见明显变化.结论：2通过诱导A549细胞发生S/G
5、2期阻滞而抑制其增殖，其机制可能与下调Bcl2表达及阻滞细胞周期有关.【关键词】鬼臼毒素；肺肿瘤；腺癌；细胞凋亡；抗原，CD95；基因，Bcl20引言鬼臼毒类化合物用于民间药物治疗已有较长的历史.freelethyl1”,2”,5”,6”tetrahydropyridinenitroxyl4”shiffsbase］4deoxy4demethylepipodophyllotoxin），其同类化合物可显著抑制小鼠移植性肿瘤白血病P388和实体瘤S180，可以诱导Raji细胞、NB4细胞凋亡［2-3］.我们观察了2对人肺腺癌A549细胞的凋亡诱导效应，并对其
6、作用机制进行了初步探讨.1材料和方法1.1材料鬼臼毒素由兰州大学化工学院合成，用DMSO配成8g/L的贮备液，-20℃冻存备用.MTT购自Sigama公司.流式细胞术（FCM）用单抗（FITC标记的鼠抗人FasmAb和鼠IgG1同型对照，FITC标记的美国仑鼠抗人Bcl2mAb和美国仑鼠抗人单克隆IgG同型对照），为美国Caltag产品.A549细胞株购自中科院上海细胞生物学研究所.细胞贴壁生长于含100g/L小牛血清（杭州四季青生物工程公司产品）的RPMI1640（GibcolBRL公司）完全培养基中，用含2.5g/L胰酶的消化液进行传代,置37℃,
7、50mL/LCO2孵箱中培养.实验时选用对数生长期细胞.1.2方法细胞增殖活性检测采用MTT比色法，将细胞密度调整为1×108/L，接种于96孔培养板（Costar），每孔100μL,实验组分别加入不同浓度（10,20,40,80mg/L）2,对照组加入等体积PBS,另设只加完全培养液的调零组,每组4个复孔,饱和湿度条件下,37℃,50mL/L培养箱中培养,分别于24,48,72h加入MTT10μL/孔.继续培养4h，每孔加入100g/L的SDS100μL终止培养，37℃过夜，用酶联免疫检测仪测定570nm波长处A值，计算细胞生长抑制率和半数抑制浓度（
8、IC50）.细胞经80mg/L2作用48h后用2.5g/L胰酶消化，收集细胞悬液离心（900r
