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1、四川大学学医学版di)2013;44(6):902-906JSichuanUniv(MedSciEd)’地塞米松对顺铂诱导人肺腺癌细胞株凋亡的抑制作用及其机制*曹菲,张智慧△,吴萍,李力,黄建鸣四JII省肿瘤医院肿瘤内科(成都610041)【摘要】目的研究地塞米松(Dex)对顺铂(CDDP)引起的人肺腺癌细胞株SPCA/I凋亡的抑制作用及其分子机制探讨。方法体外培养SPCA/I细胞,分别加入不同浓度Dex培养24h后,加人不同浓度CDDP继续培养48h,采用二甲基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;用1/,mo
2、l/IDex刺激SPCA/I细胞,分别于lh、2h、4h、6h、12h采用RT—PCR技术,检测SPCA/I细胞中糖皮质激素诱导的蛋白激酶1基因(SGK一1)和丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶l(MKP—1)基因的表达;用生物素标记的抗糖皮质激素受体(GR)抗体对SPCA/I细胞中GR行细胞免疫组化检测。结果sPcA/I细胞经Dex刺激后,对CDDP所致的抑制细胞生长和凋亡呈抵抗作用(P<0.05)。Dex刺激后的SPCA/1细胞表达SGK一1上调,在12h时表达达高峰,未检测到MKP一1表达;细胞免疫组化显示SPCA/I细胞经Dex刺激后GR表
3、达上调,细胞内GR数目高于对照组(P<0.05)。结论体外实验结果表明,Dex对CDDP引起的SPCA/I细胞凋亡有抑制作用。其分子机理可能是通过上调细胞内GR数目,增强通路下游SGK1的表达,从而产生抗凋亡作用。【关键词】地塞米松肺癌顺铂凋亡PreliminaryStudyofApoptoticInhibitionandItsMolecularMechanismofDexamethasoneonCisplatin—inducedHumanLungAdenocarcinomaCellLineSPCA/ICA0Fei,ZHANGZhi—hu
4、i,UPing,LILi,HUANGJiang—ming.DepartmentoJ’MedicalOncology,SichuanProvincialCancerHospitalandInstitute,Chengdu61004l,China△Correspondingauthor,E—mai1:13881889731@139.com[Abstract]ObjectiveTostudytheapoptoticinhibitionanditsmolecularmechanismofdexamethasone(Dex)oncisplatin(
5、CDDP)一inducedhuman1ungadenoearcinomacells.MethodsThehumanlungadenocarcinomacellline,SPCA/I,waspre-culturedinvitrofor24hourswithDexindifferentconcentrationandthendifferentconcentrationofCDDPwasadded.Thecellswereculturedforanother48hours.Thesurviva1rateofthecellswasdetermin
6、edbyMTTcolorimetry.TheappototicrateofSPCA/Icellsmeasuredbyflowcytometer.Usinglumol/IDextostimulatetheSPCA/IcellsRNAsofthecellsatdifferenttimepoints(1h,2h,4h,6h,12h)wereextractedrespective1y.Semi—quantitativeRT_PCRtechnologywasusedtodetecttheexpressionoftheserumandglucocor
7、ticoid—inducedkinase(SGK一1)andmitogen—activatedproteinkinasephosphatase一1(MKP一1)inSPCA/Icells.Simultaneouslytheglucocorticoidreceptor(GR)oftheSPCA/Icelllinecellsweremeasuredbyusingbiotin-labeledanti—glucocorticoidreceptorantibodywithimmunohistochemistryassay.ResultsSPCA/I
8、cellsshowedresistancetoCDDP—。inducedapoptosiswhilepre—。culturedwithDexandtheresistanceintensityw
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