地塞米松对顺铂引起的人肺腺癌细胞spca1凋亡的抑制作用及其分子机制的初步探讨

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1、摘要地塞米松对IIl页,车fl引起的人肺腺癌细胞SPC-A1凋亡的抑制作用及其分子机制的初步探讨曹菲-7曰F导师：张智慧教授广西医科大学目的：研究地塞米松(DEX)对顺铂(CDDP)引起的人肺腺癌细胞SPC—A1凋亡的抑制作用及探讨其初步的分子机制。方法：采用人肺腺癌细胞SPC-A1，分另JJ／Jn入不同浓度的DEX体外诱导培养，24小时后加入不同浓度的CDDP继续培养48小时，用MTT法检测细胞的存活率；再用1umol／LDEX刺激SPC-A1细胞，分别于lhr、2hr、4hr、6hr、12hr提取细胞的总RNA：采用半定量RT-PCR技术，

2、检测SPC-A1细胞中的血清／糖皮质激素一诱导激酶(SGK-1)和有丝分裂原蛋白激酶(MKP-1)的表达：同时用生物素标记的抗糖皮质激素受体(GR)抗体对SPC-A1细胞行免疫组化染色来检测GR的表达。结果：SPC-A1细胞经DEX诱导后，对CDDP所致的凋亡有抵抗作用并与DEX浓度呈剂量依赖关系。DEX刺激后的SPC-A1细胞表达SGK一1，在12hr时表达达高峰：细胞免疫组化显示SPC-A1细胞经DEX刺激后GR上调，细胞内GR表达的阳性细胞数明显高于对照组；没有检测到IdKP—l表达。结论：DEX对CDDP引起SPC-A1细胞的凋亡有抑制

3、作用。可能的分子机理是通过上调细胞内GR表达，上调其通路下游抗凋亡蛋白SGK-1的表达，导致SPC-A1细胞产生抗凋亡作用。ABSTRACTPreliminarystudyofapoptoticinhibitionanditsmolecularmechanism0ldexametnasoneonClSDiatln-inducedIiumanInngl●J●1·●■●·■●-ladenocarcinomacellSPC．AlCA0FeiSupervisedby：ProfessorZHANGZhi-huiGuangxiMedicalUniversi

4、tyABSTRACTobjective：Toinvestigatetheinhibitionefficacyandmolecularmechanismofdexamethasone(DEX)onapoptosisofhumanlungadenocarcinomacellSPC—A1inducedbycisplatin(CDDP)．Methods：SPC—·A1cellswaspre·-culturedinvitrofor24hourswithDEXindifferentconcentrationsandthenCDDPwasaddedandth

5、ecellswereculturedforanother48hours．thenthesurvivalratesofthecellsdeterminedbyMTT．SPC-A1cellswerestimulatedby1pmol／LDEX，andthentotalRNAwereextractedrespectivelyatlhr，2hr，4hr，6hr，12hr．111eexpressionoftheserum／glucocorticoid-inducedkinase(SGK-1)andmitogen—activatedproteinkinas

6、ephosphatase一1(MKP—1)inSPC-AIcellswasdetectedbysemi·quantitativeRT-PCRtechnology．Theexpressionofglucocorticoidreceptor(GR)inSPC·AIcellsWasmeasuredbyimmunohistochemistry(IHC)谢mantibodyofbiotin·labeledanti·GR．Theresults：SPC—AlcellsshowedresistancetoCDDP—inducedapoptosiswhenpre

7、-culturedDEX．andtheresistanceintensitywasDEXconcentration·dependent．111eSPC—A1cellsstimulatedbyDEXexpressedSGK-1whichpeakleveloccurredat12hr．Up-regulatedexpressionofGRinSPC-A1cellsstimulatedbyDEXWasdetectedbyIHC．111enumbercellsexpressingGRinSPC·A1cellswassignificantlyhighert

8、hanthatthecontrolgroup．ButtheexpressionofMKP·lWasnotdetectedlABSIRAClConclu