酪酪肽和维生素e琥珀酸酯对人食管腺癌seg1细胞增殖和凋亡的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。一弛张弘燃嚷铆嚣：研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的硗藐工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定

2、。·本论文由本人独立撰写，文责自负。，研究一：粥笮聊躲肜移一pY年多月多护日中文摘要酪酪肽和维生素E琥珀酸酯对人食管腺癌SEG-1细胞增殖与凋亡的影响摘要流行病学资料显示，食管腺癌(esophagealadenocarcinoma，EA)的发病率在世界范围内有日益上升的趋势，尤其是在西方发达国家，食管腺癌己成为发病率上升速度最快的恶性肿瘤，Barrett食管(Barrett’Sesophagus，BE)是其主要的危险因素。食管腺癌预后差，为此加强深入研究，采取医学干预和预防措施具有重要意义。近年来国内外研究发现，胃肠肽类激素酪酪肽(peptideYY，

3、PYY、)对胃肠道肿瘤的生物学行为具有重要的调控作用。‘PYY是一种由36个氨基酸组成的多肽，主要存在于胃肠道黏膜的L型内分泌细胞中。PYY具有多种调节胃肠道的功能，以抑制作用为主，包括减少胃液分泌和胰腺的外分泌，减慢胃排空和小肠的活动，减少胃肠道和胰腺的血流量，抑制胆囊收缩素的生成。PYY在循环中分解为两种形式PYY(1．36)*DPYY(3．36)。PYY(1．36)通过与YI齐NY5受体结合发挥刺激食欲，增加体重的作用，]而PYY(3—36)与Y2受体结合可抑制食欲，减轻体重。肥胖是与食管腺癌密切相关的危险因素之一，而PYY(3-36)具有潜在的

4、抗肥胖作用。国外研究证实PYY存在于多种肿瘤组织中并抑制如胰腺癌、结肠癌、食管腺癌、乳腺癌、前列腺癌多种肿瘤的生长，并可缓解恶液质状态。PYY抑制胰腺和胸腺肿瘤生长的机制可能是直接或间接通过减少细胞内环磷酸腺苷(cyclicadenosinemonophosp．中文摘要hate，cAMP)的含量。但其确切机制尚不清楚。维生素E琥珀酸酯(vitaminEsuccinate，VES)是维生素E(VE)的衍生物，与VE相比，VES的性质稳定，VES在体内和体外均可有效地抑制多种肿瘤细胞的生长，如B淋巴瘤、前列腺癌、子宫内皮细胞癌、胃癌和结肠癌等都具有显著的凋

5、亡诱导作用，而对机体正常细胞无毒性。VES可能有望成为一种有潜力的抗癌药物。目前有关PYY和VES对食管腺癌细胞生长影响的研究尚少，本研究通过体外培养SEG．1细胞以探讨PYY和VES对食管腺癌细胞增殖的抑制及凋亡的诱导作用。目的：观察PYY、VES对人食管腺癌细胞系SEG．1增殖与凋亡及PYY对SEG．1细胞内cAMP含量的影响。旨在探讨PYY*口VES对SEG．1细胞的作用，为今后临床应用PYY和VES防治食管腺癌提供实验或理论依据。方法：体外培养人食管腺癌细胞系SEG．1，应用含10％胎牛血清的DMEM培养液，于37℃、5％C02恒温箱内饱和湿度

6、下培养。实验分为五组：空白对照组、乙醇对照组(终浓度为0．2％)、PYY组(500pmol·ml‘1)、VES组(20mg·Lq)、联合用药组(500pmol·ml—PYY+20mg·L。VES、)。1MTT方法检测PYY、VES分别与联合干预在体外对SEG一1细胞增殖的影响：取对数生长期细胞接种于96孔板，经PYY、VES处理细胞12、24、48h后，按步骤加入20¨lMTT溶液和150pl二甲基亚砜，置酶联免疫检测仪测定各孔在570nm处的光吸收值(0D)，并计算生长抑制率。2PI染色流式细胞学检测细胞凋亡百分率：收集经PYY、VES分别及联合作用

7、24h的SEG一1及对照组细胞，冷PBS漂洗，70％乙醇4。C预冷固定，上机检测前离心去固定中文摘要液，O．5％胃蛋白酶消化，碘化丙锭(PropidiumIodide，PI：50mg／LTrintonX一1001．O％)室温避光染色。流式细胞仪上机检测，应用软件进行分析。3末端缺口原位标记(TUNEL)法分析细胞凋亡测定细胞凋亡指数：收集经PYY、VES干预24h后的细胞爬片，加入相关试剂，按照TUNEL试剂盒说明书操作。4采用放射免疫法测定不同浓度2JI(i0～、10一、10。一、10墙mol·Lo)的PYY干预24h后的人食管腺癌细胞中cAMP的含

8、且里O结果：1PYY、VES对SEG．1细胞增殖的影响：MTT法检测结果显示PYY和VES均在