降钙素基因相关肽对hacat细胞增殖和凋亡的影响论文

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1、降钙素基因相关肽对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响论文【摘要】目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法以不同浓度(10-7～10-4mmol/L)CGRP作用于HaCaT细胞，用MTT法检测其对细胞吸光度（A）及生长曲线的影响；流式细胞术分析其对细胞凋亡率的影响。结果不同浓度CGRP组A值均较对照组升高（F=7.78，q=3.53～7.71，P0.05）。CGRP浓度在10-7～10-5mmol/L时HaCaT细胞吸光度随浓度增加而升高,但差异无统计学意义（P0.05），在10-4mmol/L时A值较10-5mmol/L时反而

2、降低（q=4.18，P0.05）。细胞凋亡率随CGRP浓度升高下降，与对照组比较，差异有显著性（χ2=85.75～374.24.freelmol/L)andcellgroinedbyMTT.Apoptosisrateetry.ResultsAbsorbanceofHaCaTcelltreatedoteHaCaTcellproliferationandinhibitapoptosiseffectively.TheeffectisrelatedtotheconcentrationofCGRP.［KEY）、DMEM培养基、四甲基偶氮唑蓝（MTT）（Sigma公司）

3、，AnnexinV凋亡试剂盒（深圳晶美公司），碘化丙啶、胰蛋白酶（北京中昊时代生物科技公司），乙二胺四乙酸钠（EDTA，上海生工生物工程公司），二甲基亚砜（DMSO，天津市天河化学试剂厂）。1.1.3主要仪器、设备酶联免疫检测仪(BioRadModal550USA)，流式细胞仪(BectonDickinsonUSA)，LXJⅡ型离心机（南京第一医疗器械厂），倒置显微镜(Olympus)，CO2孵育箱(MemmertUSA)。1.2方法1.2.1实验分组用KCSFM配制成CGRP浓度分别为10-7、10-6、10-5、10-4mmol/L的实验组和不加

4、CGRP的对照组。1.2.2CGRP对细胞增殖和生长曲线影响的检测采用MTT法检测。将HaCaT细胞以每孔4×103的密度接种至96孔板，CO2培养箱内培养24h后，吸弃培养液，各孔分别加入上述不同浓度的培养液200μL,并设空白对照组。每天每组取3孔加入MTT溶液20μL（5g/L），继续培养4h，小心吸去孔内上清液，加入DMSO，振荡10min，在酶联免疫检测仪上测定各孔490nm处的吸光度值（A），连续测定5d。取第48小时吸光度值计算增殖率。并以时间为横轴，吸光度值为纵轴，绘制生长曲线。1.2.3细胞凋亡检测将HaCaT细胞以每孔2×105的密度接种

5、于6孔板培养24h后，吸弃培养液，PBS冲洗3次，分别加入上述各浓度的培养液,继续培养48h后，严格按照AnnexinV试剂盒说明书处理细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡。1.3统计学处理结果以±s表示，数据间比较采用方差分析及χ2检验，应用SPSS13.0软件进行数据处理。2结果2.1CGRP对HaCaT细胞增殖和生长曲线影响2.1.1CGRP对HaCaT细胞增殖影响各实验组吸光度（A）均较对照组上升，差异有显著性（F=7.78，q=3.53～7.71，P0.05）。浓度在10-7～10-5mmol/L之间时A值随CGRP浓度增加而升高，但各组间差异无统计学意

6、义（P0.05）；CGRP浓度为10-4mmol/L时A值虽仍比对照组高，但较10-5mmol/L时明显降低（q=4.18，P0.05），与其他剂量实验组相比较，差异无统计学意义（P0.05）。见表1。表1CGRP对HaCaT细胞增殖的影响（略）与对照组比较，F=7.78，*q=3.53～7.71，P0.052.1.2CGRP对HaCaT细胞生长曲线的影响由于10-4mmol/L组浓度升高，但促增殖作用却减弱，故取10-4mmol/L组及促进增殖能力最强的10-5mmol/L组做生长曲线。与对照组比较，在CGRP作用下HaCaT细胞提前进入对数生长期。在对数

7、生长期（第2、3天），10-5mmol/L组细胞数最多；10-4mmol/L组与对照组相比细胞数增多，但较10-5mmol/L组减少。到达平台期后，3组细胞数又相接近。2.2CGRP对HaCaT细胞凋亡的影响作用48h后，对照组凋亡率为7.93%，10-7～10-4mmol/L组细胞凋亡率分别为4.74%、3.73%、2.81%、1.99%，各实验组与对照组比较，差异有统计学意义（χ2=85.75～374.24，P0.01）。3讨论CGRP是一种含37个氨基酸的神经肽，在皮肤中主要存在于真皮、表皮交界处，是人体皮肤中含量最丰富的一种神经肽。CGRP自身或通过

8、与体内多种神经肽和细胞因子如神经生长因子（NGF）1