降钙素基因相关肽对hacat细胞增殖和凋亡的影响

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1、降钙素基因相关肽对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响【】　　目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法以不同浓度(10-7～10-4mmol/L)CGRP作用于HaCaT细胞，用MTT法检测其对细胞吸光度（A）及生长曲线的影响；流式细胞术分析其对细胞凋亡率的影响。结果不同浓度CGRP组A值均较对照组升高（F=7.78，q=3.53～7.71，P<0.05）。CGRP浓度在10-7～10-5mmol/L时HaCaT细胞吸光度随浓度增加而升高,但差异无统计学意义（P>0.05），在10-4mmol/L时A值较10

2、-5mmol/L时反而降低（q=4.18，P<0.05）。细胞凋亡率随CGRP浓度升高下降，与对照组比较，差异有显著性（χ2=85.75～374.24，P<0.01)。结论CGRP可以促进HaCaT细胞增殖，抑制其凋亡,且作用强度与浓度有关。【关键词】降钙素基因相关肽HaCaT细胞银屑病细胞凋亡医学职称论文发表医学论文发表X医药论文发表医学论文发表X站医学论文发表　　［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheeffectofcalcitoningenerelatedpeptide(CGRP)onthepro

3、liferationandapoptosisofHaCaTcells.MethodsAbsorbance(A)ofHaCaTcelltreatedmol/L)andcellgroinedbyMTT.Apoptosisrateetry.ResultsAbsorbanceofHaCaTcelltreatedoteHaCaTcellproliferationandinhibitapoptosiseffectively.TheeffectisrelatedtotheconcentrationofCGRP.　　［KEY）、DMEM培养基、四甲基偶氮唑蓝（MT

4、T）（Sigma公司），AnnexinV凋亡试剂盒（深圳晶美公司），碘化丙啶、胰蛋白酶（北京中昊时代生物科技公司），乙二胺四乙酸钠（EDTA，上海生工生物工程公司），二甲基亚砜（DMSO，天津市天河化学试剂厂）。　　1.1.3主要仪器、设备酶联免疫检测仪(BioRadModal550USA)，流式细胞仪(BectonDickinsonUSA)，LXJⅡ型离心机（南京第一医疗器械厂），倒置显微镜(Olympus)，CO2孵育箱(MemmertUSA)。　　1.2方法　　1.2.1实验分组用KCSFM配制成CGRP浓度分别为10-7、10-6、

5、10-5、10-4mmol/L的实验组和不加CGRP的对照组。　　1.2.2CGRP对细胞增殖和生长曲线影响的检测采用MTT法检测。将HaCaT细胞以每孔4×103的密度接种至96孔板，CO2培养箱内培养24h后，吸弃培养液，各孔分别加入上述不同浓度的培养液200μL,并设空白对照组。每天每组取3孔加入MTT溶液20μL（5g/L），继续培养4h，小心吸去孔内上清液，加入DMSO，振荡10min，在酶联免疫检测仪上测定各孔490nm处的吸光度值（A），连续测定5d。取第48小时吸光度值计算增殖率。并以时间为横轴，吸光度值为纵轴，绘制生长曲线。　　1

6、.2.3细胞凋亡检测将HaCaT细胞以每孔2×105的密度接种于6孔板培养24h后，吸弃培养液，PBS冲洗3次，分别加入上述各浓度的培养液,继续培养48h后，严格按照AnnexinV试剂盒说明书处理细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡。　　1.3统计学处理　　结果以±s表示，数据间比较采用方差分析及χ2检验，应用SPSS13.0软件进行数据处理。　　2结果　　2.1CGRP对HaCaT细胞增殖和生长曲线影响　　2.1.1CGRP对HaCaT细胞增殖影响各实验组吸光度（A）均较对照组上升，差异有显著性（F=7.78，q=3.53～7.71，P<0.0

7、5）。浓度在10-7～10-5mmol/L之间时A值随CGRP浓度增加而升高，但各组间差异无统计学意义（P>0.05）；CGRP浓度为10-4mmol/L时A值虽仍比对照组高，但较10-5mmol/L时明显降低（q=4.18，P<0.05），与其他剂量实验组相比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。　　表1CGRP对HaCaT细胞增殖的影响（略）　　与对照组比较，F=7.78，*q=3.53～7.71，P<0.05　　2.1.2CGRP对HaCaT细胞生长曲线的影响由于10-4mmol/L组浓度升高，但促增殖作用却减

8、弱，故取10-4mmol/L组及促进增殖能力最强的10-5mmol/L组做生长曲线。与对照组比较，在CGRP作用下HaCa