toll样受体7(tlr7)激活对hacat细胞增殖和分化的影响

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1、KinaseSystemicLupusErythematosusSLE系统性红斑狼疮TLR8Toll-likereceptorTOLL样受体8PathogenassociatedmolecularpatternPAMP病原体相关分子模式PatternrecognitionreceptorPRR模式识别受体LY2940022-(4-morpholiny)-8-phenyl-4H-1-Benzopyran-4-one特异PI3K抑制剂TOLL样受体7（TLR7）激活对HaCaT细胞增殖及分化的影响中文摘要目的探讨TLR7的激活对HaCaT细胞增殖与分化的影响及其可能的机制。方

2、法培养HaCaT细胞，以不同剂量的TLR7配体Gardiquimod经不同的时间体外刺激HaCaT细胞，MTT及流式细胞术分析TLR7的激活对HaCaT细胞增殖的影响。以不同剂量的TLR7配体Gardiquimod经不同的时间体外刺激HaCaT细胞，加入氯化钙诱导HaCaT细胞分化，Western-Blot分析HaCaT细胞的分化Markers（颗粒层：Keratin1，基底层：Keratin5和棘层：Involucrin）并以此分析TLR7的激活对氯化钙诱导HaCaT细胞分化的影响。Western-blotting分析TLR7在HaCaT细胞中激活的信号通路PI3K-A

3、KT和RAS-MAPK等。在TLR7配体Gardiquimod处理HaCaT细胞前1h，分别加入特异性阻断剂(PD98059及LY2940002)阻断TLR7配体Gardiquimod激活的相关信号通路，然后分析阻断剂对TLR7配体Gardiquimod调控HaCaT细胞增殖及分化影响，从而探讨PI3K-AKT和RAS-MAPK信号通路在TLR7配体Gardiquimod对HaCaT细胞增殖及分化调控中的作用。结果MTT及流式细胞分析结果显示：TLR7配体Gardiquimod促进HaCaT细胞增殖，且具有时间及剂量依赖性；TLR7配体Gardiquimod能够抑制氯化钙

4、诱导的HaCaT细胞分化markers（Keratin1及Involucrin）的表达，存在时间效应及剂量效应；信号通路分析揭示TLR7配体Gardiquimod能够增加ERK1/2和MAPK的水平；阻断剂的研究发现TLR7配体Gardiquimod部分依赖PI3K-AKT和RAS-MAPK途径发挥其促进增殖及抑制分化作用。结论TLR7配体Gardiquimod部分依赖PI3K-AKT和RAS-MAPK途径发挥其促进增殖及抑制分化作用。关键词HaCaT细胞；TOLL样受体7（TLR7）；增殖；分化；信号通路。EffectoftheactivationofTOLL-Like

5、receptor7(TLR7)ontheProliferationandDifferentiationofHaCaTCellsAbstractObjectToexploretheimpactoftheactivationofTOLL-LikeReceptor7(TLR7)ontheproliferationanddifferentiationofHaCaTcells，andthenuncoverthemechanism.MethodHaCaTcellswereculturedandtreatedwithvariousconcentrationoftheligandsofT

6、LR7namelyGardiquimodfordifferenttime.MTTandFACSmethodswereusedtoanalyzethetheactivationofTOLL-LikeReceptor7(TLR7)ontheproliferationofHaCaTcells.ThoughtreatedwithvariousconcentrationoftheligandsofTLR7namelyGardiquimodfordifferenttime,themakers(thelayerofgranuleKeratin1,thelayerofbasisKerat

7、in5andthelayerofthornInvolucrin)ofHaCaTcellsdifferentiationinducedbythecertainconcentrationofCaCl2weredetectedbyReal-timePCRandWestern-Blot,andbythisweexploretheimpactoftheactivationofTOLL-LikeReceptor7TLR7onthedifferentiationofHaCaTcellsinducedbyCaCl2.Furthernore,w