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时间:2018-11-10
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1、降钙素基因相关肽对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响【摘要】 目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法以不同浓度(10-7~10-4mmol/L)CGRP作用于HaCaT细胞,用MTT法检测其对细胞吸光度(A)及生长曲线的影响;流式细胞术分析其对细胞凋亡率的影响。结果不同浓度CGRP组A值均较对照组升高(F=7.78,q=3.53~7.71,P<0.05)。CGRP浓度在10-7~10-5mmol/L时HaCaT细胞吸光度随浓度增加而升高,但差异无统计学意义(P>0.05),在10-4mmo
2、l/L时A值较10-5mmol/L时反而降低(q=4.18,P<0.05)。细胞凋亡率随CGRP浓度升高下降,与对照组比较,差异有显著性(χ2=85.75~374.24,P<0.01)。结论CGRP可以促进HaCaT细胞增殖,抑制其凋亡,且作用强度与浓度有关。【关键词】降钙素基因相关肽HaCaT细胞银屑病细胞凋亡 [ABSTRACT]ObjectiveToinvestigatetheeffectofcalcitoningenerelatedpeptide(CGRP)ontheproliferationandapopto
3、sisofHaCaTcells.MethodsAbsorbance(A)ofHaCaTcelltreatedmol/L)andcellgroinedbyMTT.Apoptosisrateetry.ResultsAbsorbanceofHaCaTcelltreatedoteHaCaTcellproliferationandinhibitapoptosiseffectively.TheeffectisrelatedtotheconcentrationofCGRP. [KEY)、DMEM培养基、四甲基偶氮唑蓝(MTT)(Sigma公司),
4、AnnexinV凋亡试剂盒(深圳晶美公司),碘化丙啶、胰蛋白酶(北京中昊时代生物科技公司),乙二胺四乙酸钠(EDTA,上海生工生物工程公司),二甲基亚砜(DMSO,天津市天河化学试剂厂)。 1.1.3主要仪器、设备酶联免疫检测仪(BioRadModal550USA),流式细胞仪(BectonDickinsonUSA),LXJⅡ型离心机(南京第一医疗器械厂),倒置显微镜(Olympus),CO2孵育箱(MemmertUSA)。 1.2方法 1.2.1实验分组用KCSFM配制成CGRP浓度分别为10-7、10-6、10-5、
5、10-4mmol/L的实验组和不加CGRP的对照组。 1.2.2CGRP对细胞增殖和生长曲线影响的检测采用MTT法检测。将HaCaT细胞以每孔4×103的密度接种至96孔板,CO2培养箱内培养24h后,吸弃培养液,各孔分别加入上述不同浓度的培养液200μL,并设空白对照组。每天每组取3孔加入MTT溶液20μL(5g/L),继续培养4h,小心吸去孔内上清液,加入DMSO,振荡10min,在酶联免疫检测仪上测定各孔490nm处的吸光度值(A),连续测定5d。取第48小时吸光度值计算增殖率。并以时间为横轴,吸光度值为纵轴,绘制生长曲线。
6、 1.2.3细胞凋亡检测将HaCaT细胞以每孔2×105的密度接种于6孔板培养24h后,吸弃培养液,PBS冲洗3次,分别加入上述各浓度的培养液,继续培养48h后,严格按照AnnexinV试剂盒说明书处理细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡。 1.3统计学处理 结果以±s表示,数据间比较采用方差分析及χ2检验,应用SPSS13.0软件进行数据处理。 2结果 2.1CGRP对HaCaT细胞增殖和生长曲线影响 2.1.1CGRP对HaCaT细胞增殖影响各实验组吸光度(A)均较对照组上升,差异有显著性(F=7.78,q=3.53~7.71
7、,P<0.05)。浓度在10-7~10-5mmol/L之间时A值随CGRP浓度增加而升高,但各组间差异无统计学意义(P>0.05);CGRP浓度为10-4mmol/L时A值虽仍比对照组高,但较10-5mmol/L时明显降低(q=4.18,P<0.05),与其他剂量实验组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。 表1CGRP对HaCaT细胞增殖的影响(略) 与对照组比较,F=7.78,*q=3.53~7.71,P<0.05 2.1.2CGRP对HaCaT细胞生长曲线的影响由于10-4mmol
8、/L组浓度升高,但促增殖作用却减弱,故取10-4mmol/L组及促进增殖能力最强的10-5mmol/L组做生长曲线。与对照组比较,在CGRP作用下HaCaT细胞提前进入对数生长期。在对数生长期(第2、3天),10-5mm
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