PA28α对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUnivers时forthedegreeofMasterTheefIfectofPA280【onproliferation，apoptosisandmigI．ationofesophagealsquamouscancercellsByHailiJiangsupeⅣisor：Prof医珥Pro￡FangxiaGuanCellBiologyD印叭mentofBioengineeringMay，2014原创性声明l㈣0㈣洲Ⅲ帅㈣洲川』Y2546984本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所

2、取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：酗确胁硎年厂月衫日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后

3、发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：荡碡厕日期：训年厂月冶日摘要PA28Q对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响硕士研究生蒋海丽导师匦关方霞郑州大学生命科学院郑州450001蛋白酶体是一类多催化位点蛋白酶复合物，负责细胞内大部分蛋白质的降解，受着多种复杂因素的调控，通过有目的的降解受损伤的或者错误折叠的蛋白质进而调节整个细胞的尘命过程，使整个生命过程得以高效准确地完成，这些过程包括细胞周期、细胞凋亡、DNA修复、信号转导和免疫应答等11]。研究显示，蛋白酶体是一个多亚基蛋

4、白水解复合物，在生物体内最普遍的蛋白酶体形式为26s蛋白酶体，由20s核心颗粒与具有激活核心颗粒作用的蛋白酶体激活因子组成12J。在蛋白酶体激活因子作用下，蛋白质底物进入20S核心颗粒的中心水解部位被降解。目前，在生物体内主要发现了两大类重要的蛋白酶体激活因子，一类蛋白酶体激活因子是19s，又称PA700。另一类是PA28(proteaSomeactivator28)蛋白酶体激活因子家族，又称11S或REG。11S是由包括PA28Q、PA28p和PA28丫三个成员组成【3

5、。在电镜下，PA280【是一个环状颗粒，无ATP存在时即可与20S结合，形成PA280【一2

6、0S复合物，可以增大20S核心颗粒与多种底物肽的结合能力，提高生物体降解蛋白质的最大反应速度【41。食管癌是我国北方的恶性肿瘤之一【5】。由于它在早期很难诊断，并且带有很强的转移能力，即使能够诊断出来，一般也已处于晚期。并且，食管癌的预后情况差，容易复发，确诊后的病人5年生存率仅占5。10％【酬。目前治疗食管癌的情况并不乐观，这种不乐观的情况促使了我们进一步了解食管鳞癌的发生发展机制，为降低食管鳞癌的发生率和研发新的治疗食管癌的药物提供实验依据。目前，大量研究发现多种人类恶性肿瘤中存在PA28异常表达现象。张林等pJ发现了削2黝基因能够抑制胃癌细胞的生长、增殖，同

7、时还能够影响其细胞周期，对抑制胃癌细胞的恶性表现有一定的意义。Lenlaire等【8】采用蛋白质组学摘要方法检测到PA28a在正常卵巢上皮中定位和在癌细胞中定位不同，分别定位在细胞核、细胞质，因此PA28n可以作为卵巢癌的潜在生物学标记。研究显示，蛋白酶体的其他亚基可以作为肿瘤治疗的靶点。有研究表明在乳腺癌中PA28Y有显著的上调现象，并且增强了癌细胞的迁移能力，被作为检测乳腺癌的一个潜在的生理指标【9J。本课题以蛋白酶体激活因子PA28Ⅱ为研究对象，分别从转录水平和蛋白水平检测了它在正常食管上皮细胞Het．1A和食管鳞癌细胞株Ecal09、Ec9706中的表达以

8、及定位，并且进一步研究了PA280l对食管鳞癌细胞Ecal09增殖、凋亡以及迁移能力的影响，为研究PA28旺在细胞内的生物学功能提供了实验依据。本课题主要分为两个部分：第一部分：从转录水平和蛋白水平检测PA28c【在正常食管上皮细胞Het．1A和食管鳞癌细胞株Ecal09、Ec9706中的表达，分析它们的表达差异，并且观察PA28n蛋白在三株细胞中的定位情况。第二部分：研究PA28Ⅱ在食管鳞癌细胞发生发展中的作用。首先根据PA28Ⅱ在三株细胞中的表达差异，设计沉默PA28G【表达的干扰片段，并对有效干扰片段进行筛选。在IFN．v为阳性对照的情况下，用有效的干扰片段

9、干扰PA2