γ-分泌酶抑制剂dapt对食管鳞癌细胞株增殖与凋亡影响的实验研究

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1、分类号虽量2至：!垄UDC查!至密级公五编号!鳇窆窆曼!Q!垒Q12@江蒜大擎硕士学位论文MASTER’SDISSERTATIoN论文题目Y：盆鲨酶地剑剂坠△￡!盟盒笪鳞疸细胞挂擅殖量凋圭髭喧趁塞验巫究指导教师筮壶垩副熬援答辩日期2Q曼圣生鱼旦墨目分类号墼窆2：12UDC受12硕士学位论文密级公珏编号!Q2窆全SlQl垒Q!窆Y一分泌酶抑制剂DAPT对食管鳞癌细胞株增殖与凋亡影响的实验研究麟Theeffectoft--secretaseinhibitorDAPTontheproliferationandapoptosisofesophag

2、ealsquamouscarcinomacelllines作者姓名：王旭辉指导教师：焦志军副教授小组成员：王文红副教授汪毅副主任技师申请学位：硕士学科专业：临床检验诊断学论文提交日期：2013年4月28日论文答辩日期：2013年6月08日学位授予单位：江苏大学学位授予日期：2013年6月17日答辩委员会主席：吕力为教授评阅人：独创性l声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集

3、体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：圳日期：M，年()月c丫日学位论文版权使用授权书fIYrlll12frr12If9ll4lilt3I1Irl19Flljl江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊

4、(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密口学位论文作者签名：皂名√刘孓力t>年b月婶指导教师签名乡岛喜}乡3I’年毛月I户日江苏大学硕士学位论文研究目的：摘要检测食管鳞状细胞癌细胞株Ecal09和TE一1中Notch受体表达，观察Y一分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路对体外培养的Ecal09和TE．1细胞增殖和凋亡的影响，进一步探讨其作用机制，为靶向Notch通路治疗食管鳞状细胞癌提供理论依据。研究方法：(1)采用qR

5、T-PCR检测体外培养的食管鳞状细胞癌细胞株Ecal09和TE．1中Notch受体及下游靶基因Hes．1在DAPT处理前、后的表达情况。(2)应用CCK8法检测DAPT阻断Notch信号对食管鳞状细胞癌Ecal09和TE．1细胞增殖的影响。(3)通过流式细胞分析技术检测DAPT阻断食管鳞状细胞癌Ecal09和TE—l细胞株Notch受体后的细胞凋亡和周期情况，评价阻断Notch信号对细胞凋亡和周期的影响。(4)Westernblotting检测DAPT阻断食管鳞状细胞癌Ecal09和TE—l细胞株Notch受体后，与细胞增殖、凋亡有关蛋白

6、CyclinDl和Bcl．2的变化，初步探讨DAPT对食管鳞状细胞癌细胞株Ecal09和TE．1增殖和凋亡影响的作用机制。研究结果：(1)体外培养的食管鳞状细胞癌Ecal09和TE．1细胞株，除Notch-4几乎不表达外，Notch．1、Notch．2和Notch．3均有一定量的表达，其中Notch．2相对于Notch．1和Notch．3有更高的表达。Notch下游靶基因之一的Hes．1也有一定量表达。(2)在DAPT处理后，Ecal09和TE．1细胞Notch．1、Notch．3和Notch．4的表达水平变化不明显，但Notch．2表达

7、水平在DAPT作用6h后即明显降低，下游靶基因Hes．1表达水平也显著降低。(3)DAPT明显抑制食管鳞状细胞癌细胞株Etal09和TE．1细胞的体外增殖，并呈时间、剂量依赖关系。Y-分泌酶抑制剂DAPT对食管鳞癌细胞株增殖与凋亡影响的实验研究(4)DAPT阻断Ecal09和TE．1细胞株中Notch信号通路后，两株细胞凋亡率明显增加。(5)DAPT处理后的两株细胞G0／G1期所占百分比增多，细胞周期素蛋白CyclinD1水平均降低，但Bcl．2蛋白表达水平呈现相反的变化，在TE．1细胞中表达降低，而在Ecal09细胞中表达增高。研究结论

8、：食管鳞状细胞癌细胞株Ecal09和TE．1中存在Notch受体表达，Notch信号通路活化。Y．分泌酶抑制剂DAPT处理使Ecal09和TE．1细胞增殖能力降低，同时诱导了细胞的凋亡。其机制