egcg对人舌鳞癌tca8113细胞增殖与凋亡的实验研究

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1、温州医学院硕士学位论文EGCG对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的实验研究姓名：任啟平申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：方一鸣2012-05温州医学院硕士学位论文EGCG对人舌鳞癌Tea8113细胞增殖与凋亡的实验研究中文摘要【目的】表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是从绿茶中提取的一种儿茶素类物质，是绿茶主要的活性和水溶性成份，在儿茶素类中的含量占80％左右。EGCG是儿茶素中抗氧化作用最强的一种成分，属非酶抗氧化剂。具有明显的清除体内自由基、抗癌、抗炎、抗突变、抗衰老及改善肝功能等生物活性，现己被列为潜在的抗癌药物在中美等国被研究，但在人舌磷癌方面的研究极少。本实验主要通

2、过EGCG作用于在体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞系，初步研究其对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制及诱导凋亡的影响，并讨论EGCG可能的作用机理。【方法】l、对购自于中国科学院上海细胞生物学研究所的人舌鳞癌Tca8113细胞系进行常规培养，并观察细胞生长状况。待细胞生长状态良好，予以冻存细胞，各用。用倒置显微镜观察不同浓度EGCG对人舌鳞癌TcaSl13细胞生长状态的影响并拍照。2、采用CCK-8法检测不同浓度的EGCG(0、10、20、40、80tlg／mL)对Tea8113细胞的体外增殖抑制作用。3、采用AnnexinV—FITC／PI双染色法以及流式细胞术，从细胞性质上检测不同浓

3、度的EGCG对人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡情况的影响。4、采用DAPI荧光染色法从形态学上检测不同浓度的EGCG对人舌鳞癌Tea8113细胞凋亡情况的影响。【结果】1、用含10％d、牛血清(杭州四季青公司)的Hyclone改良型RPMll640培养基(内含1×10。U／L青霉素、链霉素)常规培养人舌鳞癌Tca8113，状态良好。细胞生长速度较快，3天左右即可传代一次。取对数生长期细胞予以冻存。用倒置显微镜观察结果显示：10ug／mLEGCG处理后与未加药组相比较，细胞数目、形态及体积未见明显改变：2011g／mEEGCG处理Tea8113细胞48h后出现细胞体积缩小，形态不规则，数目减少；4

4、0ug／mE与80ug／mLEGCG处理Tea8113细胞48h后细胞数目出现明显减少，细胞间间隙增大，细胞皱缩，培养液中见大量悬浮细胞及细胞碎片等。2、CCK一8法检测结果显示：与未加药组相比较，10ug／ml、20ug／ml、4011g／ml、80ug／mlEGCG在各时间段(加药后24h、48h、72h)均出现对Tea8113温州医学院硕士学位论文细胞有明显抑制作用，呈现时间及浓度依赖性(与未加药组相比较，P0．05)。3、流式细胞仪检测结果显示：经lOug／m

5、lEGCG处理的Tca8113细胞凋亡率还不能认为与对照组有区别(P>0．05)，其余EGCG处理组细胞凋亡率均高于对照组并呈现浓度依赖性(P<0．01)；40ug／mLEGCG作用Tea8113细胞24h、48h和72h后，其早期和晚期凋亡率较对照组(0小时)依次明显增加(P<0．01)，证实了EGCG诱导Tca8113细胞凋亡呈现时间依赖性。4、各浓度梯度EGCG处理Tca8113细胞48h后，免疫荧光显微镜下观察结果显示：未加药组Tca8113细胞细胞核体积、形态正常，均质蓝染，呈卵圆形或圆形。20ug／111LEGCG处理组出现细胞核皱缩，体积缩小，形态略不规则。40ug／mL与80l

6、ag／ⅡlLEGCG处理组出现明显凋亡，细胞核碎裂，形态不规则，可见典型的凋亡小体及细胞核残片等。【结论】低浓度EGCG(10lag／mL)处理Tea8113细胞后，未观察到明显的增殖抑制及诱导凋亡作用，随着EGCG浓度的增加，对Tea8113细胞出现明显的增殖抑制及诱导凋亡作用，且呈现时间及浓度依赖性。【关键字】人舌鳞癌Tca8113细胞EGCG增殖抑制细胞凋亡温州医学院硕士学位论文EffectsofEGCGontheproliferationandapoptosisofhumanoralsquamouscellcarcinomaTca8113celllineABSTRACT[Objecti

7、ve]Thecatechinisakindofpolyphenol，andthegreenteahasalotofit．Epigallocat—echin-3-gallate(EGCG)，about80％inthecatechin，isthemainactivatedandwater-solubleingredientinthegreentea．Itisastrongestantioxidanti