smad7sirna对食管鳞癌细胞株ec-1增殖及侵袭影响

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1、10召5905312006公开郑士州学大位学论硕文论文题目:Smad7siRNA对食管鳞癌细胞株EC一1增殖及侵袭的影响作者姓名:医王丰学学科门类:专业名称:病理学与病理生理学导师姓名、职称:李珊珊教授二零零八年五月郑州大学2008届硕士毕业论文Smad7siRNA对食管鳞癌细胞株EC一1增殖及侵袭的影响Smad7siRNA对食管鳞癌细胞株EC·1增殖及侵袭的影响硕士研究生王丰导师李珊珊郑州大学基础医学院病理学教研室河南省肿瘤病理重点实验室郑州450052摘要食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，它是一种高侵袭性的肿瘤。Smad7是TG

2、F.p信号通路元件之一，对TGF一p信号转导发挥负性调控，抑制TGF一p信号转导。TGF一p信号转导过程如下:活化的TGF一p首先直接与n型受体结合(TpRn)形成复合物，TGF一p构型发生变化，从而可被I型受体(TpRl)识别并结合，形成TpRn一GF一p·TpRl三聚体复合物，复合物中的TpRI被TpRll磷酸化‘，磷酸化的TpRI在胞浆内与R一Smads(SmadZ，Smad3)结合并将R一Smads磷酸化，后者与Smad4形成异源寡聚复合物，进入细胞核与特异的DNA结合，随后发生转录反应，抑制上皮细胞增殖。smad7位于染色体

3、18q21.1上，介于MADRZ与DPC4之间，两者分别编码SmadZ和Smad4蛋白。该位点等位基因的丢失见于多种恶性疾病，并且与其预后差密切相关。Smad7表达的紊乱，可影响细胞对TGF一p的应答，从而促进细胞的恶性进展。国内外研究表明在多种类型肿瘤如乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌等中都存在Smad7表达异常。目前对于在食管鳞癌是否存在Smad7表达异常，其在食管鳞癌中发生发展、浸润转移中的作用是什么，国内外研究尚少。本研究采用免疫组化技术检测食管鳞癌组织中smad7、邓Rn、Smad3的表达及相关性;采用Rl’P-CR、west

4、em·blot检测食管鳞癌细胞株EC一1转染Smad7siRNA前后smad7、几R11、Smad3的表达;采用倒置显微镜、MTT法、Boydenchamber体外侵袭实验检测食管鳞癌细胞株EC一1转染Smad7siRNA后细胞形态、增殖能力及体外侵袭能力的改变。材料和方法郑州大学20()8届硕士毕业论文Slnad7siRNA对食管鳞癌细胞株EC一1增殖及侵袭的影响1.采用免疫组织化学技术检测100例手术切除的食管鳞癌组织及其癌旁正常粘膜中Smad7、TBRll和Smad3蛋白的表达情况。2.采用RNA干扰技术使食管鳞癌细胞株EC一1

5、中Smad7基因沉默，倒置显微镜观察Smad7基因沉默后食管鳞癌细胞株EC一1形态学的变化。3.采用PJ:PCR、Westem一blot法检测食管鳞癌细胞株EC一1转染Smad7siRNA后24h、48h、72hSmad7、劝R11、Smad3mRNA及蛋白的表达。4.采用M竹法检测食管鳞癌细胞株EC一1转染Smad7siRNA后24h、48h、72h细胞增殖能力改变。5.采用Boydenchalnber体外侵袭实验检测食管鳞癌细胞株Ec一1转染smad7siRNA后24h、48h、72h细胞体外侵袭力改变。6.统计学处理:所有数据均

6、经SPSS13.0软件进行统计分析。计数数据采用阳性率表示，阳性率之间的比较采用犷检验(chi一square)，阳性率间相关性采用Kendan等级相关进行比较;计量数据采用又士S表示，两组均数的比较用t检验仓test)，两组以上均数的比较用方差分析(ANvoA)。显著性水平a二0.05。结果1.食管鳞癌组织中Smad7蛋白阳性表达率(80.0%)明显高于正常食管茹膜(58.0%)(尸<0.01)。Smad7蛋白表达与浸润深度有关，其在深层浸润组阳性表达率明显(89.1%)高于浅层浸润组(63.9%)(P<0.01);smad7蛋白表达

7、与淋巴结转移有关，其在有淋巴结转移组阳性表达率(loo%)明显高于无淋巴结转移组(74.4%)(P<0.05);Smad7蛋白表达与病理分级无关伊>0.05)。2.食管鳞癌组织中邓Rn蛋白阳性表达率(42.0%)明显低于正常食管薪膜(82.0%)(尸<0.01)。邓Rn蛋白表达与浸润深度有关，其在深层浸润组阳性表达率明显(37.5%)低于浅层浸润组(50.0%)伊<0.05);Smad7蛋白表达与病理分级有关，m级阳性表达率(18.2%)明显低于I级阳性表达率(60.0%)伊<0.05);TSRn蛋白表达与淋巴结转移有关，其在有淋巴结

8、转移组阳性表达率(18.2%)明显低于无淋巴结转移组(48.7%)俨<0.05)。‘3.食管鳞癌组织中Smad3蛋白阳性表达率(68.0%)明显低于正常食管薪膜(87.0%)(尸<0.01)。Smad3蛋白表达与淋巴结转