plce1在食管鳞癌组织中的表达及其对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响研究

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1、ExpressionofPLCE1inesophagealcanceranditseffectontheproliferationandinvasionofesophagealcancercelllinesADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByLiSu(Pathologyandpathophysiology)Dissertatio

2、nSupervisor:Prof.ChenYunzhaoMay.2015石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和

3、纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要目的：探讨PLCE1在食管鳞癌、癌旁正常组织中的表达及临床意义；下调PLCE1基因对食管鳞癌细胞增殖和侵袭调控的影响。方法：收集100例汉族食管鳞癌组织及与其对应的99例癌旁正常组织，应用免疫组化Envision法检测PLCE1蛋白表达，并分析其与食管鳞癌临床病理参数及与食管鳞癌患者预

4、后的关系；用PLCE1特异性的siRNA转染食管鳞癌细胞系Eca109、EC9706，应用qRT-PCR、Westemblot及免疫荧光检测siRNA对食管鳞癌细胞PLCE1的干扰效率；转染48小时后，MTT法和单克隆形成实验检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡情况，transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力；Westemblot检测与凋亡相关蛋白及上皮间叶转化相关标记物的蛋白表达情况。结果：（1）PLCE1蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织，并且发现PLCE1高表达与临床TNM分期及淋巴结

5、的转移有关，且PLCE1高表达组比低表达组预后差。（2）选择转染效率高的2条PLCE1-siRNA混合后转染食管鳞癌细胞，qRT-PCR、Westemblot及免疫荧光显示，将这两条siRNA混合后转染食管鳞癌细胞均能抑制PLCE1mRNA和蛋白的表达量，转染PLCE1-siRNA48小时后，MTT实验结果显示转染的食管鳞癌细胞株与对照组相比，实验组细胞的增殖受到明显抑制，单克隆形成实验显示实验组的细胞团数明显减少，流式细胞术实验显示经过PLCE1-siRNA转染的食管鳞癌细胞株与对照组相比，早期和晚期凋亡的

6、比率明显升高，利用Westemblot进一步检测凋亡相关分子Bax，BCL-2和cleaved-PARP的蛋白表达情况，结果显示沉默了PLCE1基因的食管鳞癌细胞株中促凋亡蛋白Bax和凋亡标记物cleaved-PARP的蛋白表达量明显增高，而抗凋亡蛋白BCL-2蛋白的表达量明显降低。Transwell实验显示，与对照组相比，转染PLCE1-siRNA的食管鳞癌细胞株的侵袭能力明显降低；Westemblot检测上皮间叶相关标记物，结果发现，PLCE1基因被干扰后，其上皮的标记物E-cadherin明显升高，而间

7、叶的标记物Vimentin则明显下降。结论：（1）PLCE1蛋白在食管鳞癌组织中的表达高于癌旁正常组织，PLCE1蛋白的高表达与食管鳞癌的淋巴结转移和TNM分期有关，且其高表达与食管鳞癌患者预后差密切相关。（2）下调PLCE1基因可抑制食管鳞癌细胞的增殖，促进食管鳞癌细胞的凋亡，提示PLCE1可能参与食管鳞癌细胞的增殖调控；下调PLCE1基因可显著抑制食管鳞癌细胞的侵袭，并且可能通过调控上皮间叶转化来调控食管鳞癌细胞的侵袭转移。关键词：食管鳞癌，PLCE1，免疫组化，RNA干扰，增殖，侵袭本论文由国家自然科学

8、基金（No.81160301、81360358、81460362、81260301），石河子大学重大科技攻关项目（No.gxjs2014-zdgg06），国家科技部863重大项目子课题（2012AA02A503），石河子大学―优秀青年科技人才培育计划‖联合资助立项项目（No.2013ZRKXYQ-YD19）资助。IAbstractObjective:ToinvestigatedthePLCE1exp