p70s6k在食管鳞癌中的表达及其在细胞增殖中作用的研究

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterp70S6KexpressionanditseffectofcellproliferationinesophagealsquamouscellcarcinomaBy：YanZhangSupervisor：GuiqinHouAssociateProf．PharmacologySchoolofpharmaceuticalSciencesApril2012／，／㈣愀原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取

2、得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：疆托日期：∞I二，年‘月≯日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、

3、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：霾韩日期："l国t2-年6月∞日本课题由下列基金资助(1)国家自然科学基金——编号：30901778(2)河南省教育厅自然科学研究资助计划——编号：20108310011在此深表感谢!摘要肿瘤是危害人体健康的重大疾病之一，而食管鳞癌是世界常见的六大癌症之一，其恶性程度高，五年存活率低于5％，在发展中国家极为常见，尤其是在我国河南省林县，其发病率和死亡率均很高，但是其确切的发病机制仍不清楚，不过许多实验研究证明哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalianta

4、rgetofrapamycin，mTOR)是肿瘤治疗中的重要靶点之一，并且在前期对食管鳞癌的研究中已证实，mTOR／p70S6K(70kDaribosomalproteinS6kinase)信号通路是处于异常激活状态的。由于mTOR的分子比较大，与其作用的蛋白也相对较多，因此本课题在前期的实验研究基础上，选择mTOR／p70S6K下游通路的一个重要靶点p70S6K作为研究对象，利用免疫组化、Westernblotting、RT-PCR、MTT等方法，探讨磷酸化的p70S6K(p-p70S6K)在食管鳞癌中的表达及其与食管鳞癌进程的相关性；并用shRNA干扰p70S6K的表达，检

5、测干扰前后食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素敏感性的变化，为进一步寻找治疗食管鳞癌新的分子靶点打下基础。方法1免疫组织化学收集临床食管鳞癌患者的组织标本，免疫组织化学法检测35例食管鳞癌患者的正常食管组织，癌旁组织和癌组织中rnTOR和p-p70S6K的表达，并根据临床资料进行统计分析食管鳞癌中roTOR和p-p70S6K的蛋白表达与临床病理特征间的关系与意义。2WesternblottingWesternblotting法检测食管鳞癌低分化细胞株ECl、EC9706和高分化细胞株Eeal09中p70S6K及其磷酸化蛋白的表达情况，并观察在不同时间点雷帕霉素对二者表达的影响。3

6、RT-PCR和MTTp70S6K-shRNA转染食管鳞癌EC9706细胞，用适当浓度的嘌呤霉素筛选出稳定表达株，RT-PCR法检测干扰效果；MTr法测定干扰前后雷帕霉素对细胞增殖的影响。摘要4图像处理及统计学分析免疫组织化学的结果分析采用f检验，检验水准a：o．05；Westernblotting和RT-PCR结果用IPP6．0进行灰度分析，实验重复三次，应用SPSSl3．0软件采用单因素方差分析(one-wayANOVA)，P

7、旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高，分别为20％(3／15)、46．7％(7／15)、62．9％(22／35)，组间比较有明显差异(芦7．767，P<0．05)，食管鳞癌组织中roTOR蛋白表达与肿瘤TNM分期密切相关(≤勾．121，户叼．01)；P．p70S6K在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高，分别为33．3％(5115)、73．3％(11／15)、74．3％(26／35)，其蛋白表达与肿瘤的淋巴结转移及TNM分期均密切相关(x2=5．846及4．523